植物組培之花粉培養

   花粉培養是指把花粉從花藥中分離出來(lái)，以單個(gè)花粉粒作為外植體進(jìn)行離體培養的技術(shù)。由于花粉已是單倍體細胞，誘發(fā)它經(jīng)愈傷組織或胚狀體發(fā)育成的植株都是單倍體植株。且不受花藥的藥隔、藥壁、花絲等體細胞的干擾。但缺點(diǎn)是較比花粉培養難度大。

 2.1花粉的分離

 取新鮮未開(kāi)的花蕾用自來(lái)水沖冼10min，以75%的酒精消毒10～15min，無(wú)菌水沖冼2次，再用10%漂白粉上清液浸泡20min，無(wú)菌水沖冼3～4次。然后將花藥放到加有基本培養基的小燒杯中，用注射器的內管在燒杯的壁上擠壓花藥，使花粉從花藥中釋放出來(lái)。用尼龍篩過(guò)濾掉藥壁組濾液再經(jīng)低速離心（100～160rpm），上面的碎片可用吸管吸掉，再加入新鮮培養基。連續進(jìn)行兩次過(guò)濾，到每毫升含103～104個(gè)花粉的濃度就可以了。

 簡(jiǎn)單的方法是花粉從花藥中擠出后，用鑷子取出花粉空殼，放在培養基上培養。此法適于微室栽培，但往往有藥壁等體細胞混入。

 2.2花粉的預處理

 ①低溫處理

在花粉第一次有絲分裂期進(jìn)行低溫處理。②重力的作用

在從花蕾中取出花藥前1小時(shí)，在5℃條件下進(jìn)行低溫離心機離心，可提高單倍體的誘導率。

 2.3培養基成分

在花粉培養中可添加一些物質(zhì)，有促進(jìn)生長(cháng)的作用。培養基選用Nitsch作基本培養基，含有諸如硝酸鈣、硫酸、檸檬酸鐵、酵母浸出液和椰子胚乳等。

  2.4花粉培養方法

 ①微室培養法

 取含有50～80�；ǚ鄣囊坏闻囵B液放在微室培養裝置中，為了防止花粉破裂，應在低倍條件（4℃以下）接種，然后在20℃下培養。

 ②看護培養法

在裝有50ml液體培養基的小培養皿中，用解剖針撕開(kāi)花藥釋放出花粉，形成花粉懸浮液，最后稀釋至0.5ml培養基中，含有10個(gè)花粉粒的細胞懸浮液。看護培養時(shí)，把花藥放在瓊脂培養基表面上，然后在每個(gè)花藥上覆蓋一小塊圓片濾紙。用移液管吸取1滴已準備好的花粉粒懸浮液，滴在每個(gè)小圓片濾紙上。培養在25℃和一定光照強度下，大約一個(gè)月長(cháng)出細胞群。由于完整的花藥發(fā)育過(guò)程釋放出有利于花粉發(fā)育的物質(zhì)，并通過(guò)濾紙供給花粉，促進(jìn)了花粉的發(fā)育。

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