植物組培之花藥培養

花藥培養

 花藥培養改變花粉的發(fā)育程序，使其分裂形成細胞團，進(jìn)而分化成胚狀體，產(chǎn)后再生植株，或形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植株。

 1.1 花藥的材料選擇

一般選擇單核期　此時(shí)細胞核較大居中，稱(chēng)單核中央期。隨著(zhù)細胞體積迅速增大，細胞核由中央位置推向一邊，即單核靠邊期。以上均為單核期花粉。

單核期的確定　根據細胞觀(guān)察推測，雙核期的花粉中開(kāi)始積累淀粉，不能使花粉發(fā)育成植株。通常采用醋酸洋紅或碘化鉀染色，再壓片鏡檢，以確定花粉的發(fā)育時(shí)期。但是接種前不可能把所有的花粉都進(jìn)行一次發(fā)育時(shí)期的鏡檢，通常是按照花蕾長(cháng)度大小與花粉發(fā)育年齡的相關(guān)性，在實(shí)際操作中取一定大小的花蕾進(jìn)行的。如水稻選擇劍葉葉枕抽出距下一葉，葉枕約為4～6cm的孕穗稻。

 1.2培養基的選擇

花藥培養所采用的培養基是MS、N6、B5等。添加的激素有6-BA、KT和玉米素， 2.4-D，NAA和IAA等。誘導愈傷組織的培養基可添加2.4-D，其濃度為1～3mg/l，分化培養基可添加2～3mgBA，再加少許的IAA（0.2～0.5mg/l），生根培養基可單獨添加生長(cháng)素（0.5～ 1mg/l）。

基本培養基中的蔗糖濃度對花粉的誘導生長(cháng)有一定作用。在辣椒花藥培養中以6%的蔗糖濃度對胚狀體的誘導率為最高。

 1.3消毒接種培養

花藥消毒，從健壯無(wú)病植株采集花蕾，因為未開(kāi)放的花蕾中的花藥為花被包裹，本身處于無(wú)菌狀態(tài)，可僅用70%酒精棉球將花的表面擦洗即可。也可按對其它器官消毒處理方法進(jìn)行，先用70%的酒精浸一下后，在飽和漂白粉溶液中浸10～20min，或用0.1%升汞液消毒7～10min，然后用無(wú)菌水洗3～5次。

消毒前預處理，將花蕾剪下放入水中，在冰箱4～5℃下保持3～4天。低溫貯藏后，花藥容易發(fā)生胚狀組織。接種時(shí)把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開(kāi)，取出花藥，注意去掉花絲，然后散落接種到培養基上，一個(gè)10ml的試管可接種20個(gè)花藥。

培養條件：培養溫度在23～28℃左右，每天11～16h的光照，光照強度2000～4000lx。

培養歷程：脫分化培養時(shí)，可用MS+2.4－D的培養基，或N6+2.4－D的培養基，經(jīng)10～30天，可誘導生成愈傷組織，或少數生成胚狀體。愈傷組織增殖到1～3mm左右時(shí)，應轉移到加有細胞分裂素和微量生長(cháng)素的新的分化培養基上，再經(jīng)20～30天，可獲花粉植株。

1.4花藥培養中的花粉發(fā)育過(guò)程

①營(yíng)養細胞發(fā)育途徑

在花藥離體培養中，花粉第一次有絲分裂形成不均等的營(yíng)養核和生殖核。生殖核較小，一般不分裂或只分裂1～2次，就逐步退化。而體積大的營(yíng)養核經(jīng)多次分裂且形成了細胞壁，最后變成了多細胞團，迅速生長(cháng)，很快實(shí)破細胞壁，細胞不斷分裂，可以產(chǎn)生胚狀體或愈傷組織。

 ②生殖細胞發(fā)育途徑

在這種途徑下，營(yíng)養核只分裂1～2次就退化了，而生殖核經(jīng)多次分裂發(fā)育成多細胞團。

 ③營(yíng)養細胞和生殖細胞同時(shí)發(fā)育的途徑

 花粉第一次有絲分裂形成的營(yíng)養核和生殖核同時(shí)進(jìn)行多次分裂，因此最后形成的多細胞團包括兩部分，一部分細胞較大的是由營(yíng)養細胞分裂而來(lái)；另一部分細胞較小的是由生殖細胞分裂而來(lái)。

 ④花粉均等分裂途徑

 花粉進(jìn)行均等分裂形成兩個(gè)均等的子核，以后二核間產(chǎn)生壁，形成兩個(gè)子細胞，由兩個(gè)子細胞形成多細胞團，迅速生長(cháng)，穿破藥壁而形成胚狀體或愈傷組織。

上一篇：植物組培胚珠和胚乳培養

下一篇：植物組培之花粉培養