胚珠培養
概念:在無(wú)菌條件下對授粉的子房取出胚珠進(jìn)行培養的過(guò)程。有時(shí)也把胚珠連同胎座一起取下來(lái)培養。
優(yōu)點(diǎn):胚珠培養可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養的問(wèn)題。另一方面在未受精的胚珠培養中,可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體,用于單倍體育種。
接種和培養基:從花中取出子房進(jìn)行表面消毒,在無(wú)菌條件下進(jìn)行解剖,取出胚珠,放在培養基上培養;多用Nistch培養基,也可采用MS、N6、B5等培養基。
注意:關(guān)鍵是選擇胚的發(fā)育時(shí)期,實(shí)驗證明發(fā)育到球形胚期的胚珠較易培養成功。另外可取用帶胎座甚至帶部分子房的胚珠進(jìn)行培養。
胚乳培養
概念:指對由兩個(gè)單倍的極核和一個(gè)單倍的精子結合而成的三倍體組織的培養?色@得無(wú)子結實(shí)的三倍體植株,進(jìn)而可將它加倍成六倍體植株。
接種和培養基 :取授粉4~8天后的幼果,常規消毒后,在無(wú)菌條件下切開(kāi)果實(shí),取出種子,小心分離出胚乳。接種在培養基上;
培養過(guò)程:
I)接入MS、White等培養基,附加2,4-D或NAA 0.5~2.0,BA0.1~1.0。在25~27度和黑暗條件或散射光下培養,約6-10天胚乳開(kāi)始膨大,形成愈傷組織;
II)轉入分化培養基,MS培養基附加0.5~3.0 mg/l的BA及少量的NAA。使愈傷組織長(cháng)出芽。
III)切下不定芽,插入生根培養基中,光下培養10~15天,切口處可長(cháng)出白色的不定根。
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