植物組培莖尖培養

錄入時(shí)間:2011-12-28 9:55:06 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)

概念：是切取莖尖部分或莖尖分生組織部分，進(jìn)行培養的過(guò)程。這是組織培養中用得較多的外植體。因為莖尖分生區是四個(gè)分區的主要部分。

莖尖培養可分為微莖尖培養和普通莖尖培養。

1)微莖尖：指帶有1-2個(gè)葉原基的生長(cháng)錐，其長(cháng)度不超過(guò)0.5mm。(圖)

2)普通莖尖：指取幾mm到幾十mm長(cháng)的頂芽尖及側芽尖。這里主要介紹后者。

特點(diǎn)：技術(shù)簡(jiǎn)單，操作方便，易成活和分化，成苗時(shí)間短。

步驟如下：

1．取材：挑選潔凈、無(wú)污染，生長(cháng)不久的莖，從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。木本植物可事先對莖尖噴幾次滅菌藥劑。用于普通莖尖培養。

2．消毒將采到的莖尖切成0.5～1.0cm長(cháng)，并將大葉除去，休眠芽預先剝除鱗片。(圖)將莖尖置于流水沖洗干凈，再在95%的酒精中處理30秒，然后在稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5～８分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗數次，瀝干后準備接種。

3．接種為了減少污染，在接種前再剝掉一些幼葉，使莖尖為0.5cm大小左右。用作快速繁殖。

注意：一要防褐化。接種時(shí)，不用銹刀，動(dòng)作敏捷，隨切隨接，用1～5%VC液浸泡處理。

二要防干燥

4．培養

（1）培養基：采用MS培養基或略加修改，或補加其它物質(zhì)。也可用其它培養基如White,Heller等。

培養基中生長(cháng)素是必須的，如2,4-D，IAA,NAA等，但是濃度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易產(chǎn)生畸形芽或形成愈傷組織。

（2）培養問(wèn)題處理：

莖尖在培養過(guò)程中會(huì )出現生長(cháng)太慢、生長(cháng)太快和生長(cháng)正常等三種類(lèi)型。

I生長(cháng)太慢：接種后莖尖不增大，只是莖尖逐漸變綠，出現綠色小點(diǎn)，細胞逐漸老化而進(jìn)入休眠狀態(tài)，或者逐漸變褐死亡。引起原因的是生長(cháng)素濃度太低，或是溫度過(guò)低或過(guò)高；

II生長(cháng)太快型：是接種后莖尖迅速增大，在莖尖基部產(chǎn)生愈傷組織，并迅速增殖，而莖尖不伸長(cháng)，久之莖尖也形成愈傷組織，從而喪失發(fā)育成苗的能力。引起原因一是生長(cháng)素濃度過(guò)高，引起細胞瘋狂分裂而導致愈傷組織的形成。二是光照太弱或溫度太高。

III生長(cháng)正常型是接種后莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色逐漸變綠，并逐漸伸長(cháng)，葉原基發(fā)育成可見(jiàn)的小葉，進(jìn)而形成小苗。

（3）培養條件：培養時(shí)每天光照可長(cháng)一些，最長(cháng)達16h/d，照度1500-3000Lx，溫度25±2℃。并且根據不同植物種類(lèi)，或者隨培養過(guò)程的不同，給予適當的晝夜溫差等處理。

注意：防培養基干燥，由于莖尖培養時(shí)間較長(cháng)，通過(guò)定期轉移、嚴加封口等。一般莖尖培養在４０天左右可直接長(cháng)成新梢。

（3）繼代培養用莖段切割法。

繼代培養可用MS0培養基�；蛴蒙L(cháng)物質(zhì)較低的MS培養基。

也可邊增殖邊生根培養

（4）誘導生根

I）用1/2 MS培養基，并只加入生長(cháng)素類(lèi)調節物質(zhì)，如NAA 、IBA等。注意濃度

II）也可將切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液處理4～8小時(shí)，然后轉移到無(wú)激素的生根培養基中。

III）注意較高濃度的生長(cháng)素對生根有抑制作用。

5．移栽馴化

指標：發(fā)現新梢基部生有較濃密的不定根，生長(cháng)健壯而發(fā)達，長(cháng)度在1cm以?xún)取?/SPAN>

移栽：可先進(jìn)行幾天煉苗程，取出---洗培養基--栽入馴化器皿—基質(zhì)蛭石：珍珠巖：草炭土為1:1:0.5。

栽后管理：1)初期保持濕度。基質(zhì)澆透水，床面澆濕，搭小拱棚等，并且初期要常噴霧處理，2)后期逐漸減少濕度。拱棚兩端打開(kāi)通風(fēng)，減少?lài)娝螖怠?/SPAN>以后揭去拱棚，并控制水分。

溫度管理上要掌握適宜的生根溫度，最適宜的溫度是16～20℃，春季地溫較低時(shí)，可用電熱線(xiàn)來(lái)加溫。

光照：初期弱光照，加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報紙等，后期可直接利用自然光照。