實(shí)驗：顯微鏡油浸系物鏡的使用

實(shí)驗目的 

1．復習顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術(shù)； 

2．了解油浸系物鏡的基本原理； 

3．掌握油浸系物鏡的使用方法。 

實(shí)驗內容 

1．學(xué)習油浸系物鏡的使用方法。 

2．用壓滴法觀(guān)察酵母菌、枯草芽孢桿菌活菌。 

實(shí)驗原理 

 （一）顯微鏡的構造 

1．顯微鏡的機械裝置 

 （1）鏡座和鏡臂 它們是顯微鏡的基本骨架，起穩固和支持顯微鏡的作用。 

 （2）鏡筒 鏡筒上接接目鏡，下接轉換器，形成接目鏡與接物鏡（裝在轉換器下）間的暗室。 

 （3）物鏡轉換器 物鏡轉換器上可安裝 3—4個(gè)接物鏡，可以按需要將其中的任何一個(gè)接物鏡和鏡筒接通，與鏡筒上面的接目鏡構成一個(gè)放大系統。 

 （4）載物臺 用于安放玻片。載物臺中央有一孔，為光線(xiàn)通路。在臺上裝有彈簧標本夾和推動(dòng)器，其作用為固定或移動(dòng)標本的位置，使得鏡檢對象恰好位于視野中心。 

 （5）推動(dòng)器 是移動(dòng)標本的機械裝置。 

 （6）調焦裝置 即粗螺旋和細螺旋，是移動(dòng)鏡筒調節接物鏡和標本間距離的機件。

2．顯微鏡的光學(xué)系統 

 （1）反光鏡 由一平面和另一凹面的鏡子組成，可以將投射在它上面的光線(xiàn)反射到聚光器透鏡的中央，照明標本。 

 （2）聚光器 在載物臺下面，它是由聚光透鏡、虹彩光圈和升降螺旋組成的。其作用是將光源經(jīng)反光鏡反射來(lái)的光線(xiàn)聚焦于樣品上，以得到最強的照明，使物象獲得明亮清晰的效果。 

 （3）物鏡 

     物鏡的種類(lèi)很多，可從不同角度來(lái)分類(lèi)： 

     根據物鏡前透鏡與被檢物體之間的介質(zhì)不同，可分為： 

     ①干燥系物鏡  以空氣為介質(zhì)，如常用的 40×以下的物鏡，數值孔徑均小于 1。 

     ②油浸系物鏡 常以香柏油為介質(zhì)，此物鏡又叫油鏡頭，其放大率為 90×—100×，數值孔徑值NA大于 1。 

     根據物鏡放大率的高低，可分為： 

     ①低倍物鏡 指 10×以下； 

     ②中倍物鏡 指 20×； 

     ③高倍物鏡 指 40×—65×； 

     ④油浸物鏡 指 90×以上。 

 （4）目鏡 目鏡的作用是把物鏡放大了的實(shí)像再放大一次，并把物像映入觀(guān)察者的眼中。普通光學(xué)顯微鏡的目鏡通常由兩塊透鏡組成，上端的一塊透鏡稱(chēng)“接目透鏡”，下端的透鏡稱(chēng)“聚透鏡”。上下透鏡之間或在兩個(gè)透鏡的下方，裝有由金屬制的環(huán)狀光闌或叫“視場(chǎng)光闌”。 

 （二）光學(xué)顯微鏡的成像原理 

    顯微鏡的放大是通過(guò)透鏡來(lái)完成的，單透鏡成像具有像差，影響像質(zhì)。由單透鏡組合而成的透鏡組相當于一個(gè)凸透鏡，放大作用更好。

實(shí)驗器材 

     釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢桿菌。 

     0.1%呂氏美藍染液。 

     顯微鏡；載玻片；蓋玻片；液體石蠟；擦鏡液等。 

實(shí)驗步驟 

 （一）觀(guān)察前的準備 

1．顯微鏡從顯微鏡柜或鏡箱內拿出時(shí)，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩地將顯微鏡搬運到實(shí)驗桌上。 

2．將顯微鏡放在自己身體的左前方，離桌子邊緣約 10cm左右，右側可放記錄本或繪圖紙。

3．調節光照，將 10×物鏡轉入光孔，將聚光器上的虹彩光圈打開(kāi)到最大位置，用左眼觀(guān)察目鏡中視野的亮度，轉動(dòng)反光鏡，使視野的光照達到最明亮最均勻為止。 

 （二）酵母菌、枯草芽孢桿菌水浸片的制作 

1．在載被片中央加一滴 0.1%美藍染色液 （生理鹽水），液滴不可過(guò)多或過(guò)少，以免蓋上蓋玻片時(shí)，溢出或留有氣泡。然后按無(wú)菌操作法取培養了 48小時(shí)的啤酒酵母（培養了 16小時(shí)的枯草芽孢桿菌）少許，放在美藍染色液（生理鹽水）中，使菌體與染色波均勻混合。 

2．取蓋玻片一塊，小心地蓋在液滴上，不能將蓋玻片平放下去，應先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后將整個(gè)蓋玻片慢慢放下，這樣可以避免產(chǎn)生氣泡。 

 （三）低倍鏡觀(guān)察 

    將標本片放置在載物臺上，用標本夾夾住，移動(dòng)推動(dòng)器，使被觀(guān)察的標本處在物鏡正下方，轉動(dòng)粗調節旋鈕，使物鏡調至接近標本處，用目鏡觀(guān)察并同時(shí)下降載物臺，直至物像出現，再用細調節旋鈕使物像清晰為止。用推動(dòng)器移動(dòng)標本片，找到合適的目的像并將它移到視野中央進(jìn)行觀(guān)察。 

 （四）高倍鏡觀(guān)察 

    在低倍鏡下找到合適的觀(guān)察目標并將其移至視野中心后，輕輕轉動(dòng)物鏡轉換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當調節后微調細調節器使物像清晰，利用推進(jìn)器移動(dòng)標本仔細觀(guān)察并記錄所觀(guān)察到的結果。 

 （五）油鏡觀(guān)察 

1．先用粗調節旋鈕將鏡筒提升（或將載物臺下降）約 2cm，并將高倍鏡轉出。 

2．在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。 

3．從側面注視，用粗調節旋鈕將載物臺緩緩地上升，使油浸物鏡浸入香柏油中，使鏡頭幾乎與標本接觸。將聚光器升至最高位置并開(kāi)足光圈，調節照明使視野的亮度合適，用粗調節器將載物臺徐徐上升，直至視野中出現物像并用細調節器使其清晰準焦為止。 

4．觀(guān)察完畢，下降載物臺，將油鏡頭轉出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙醚酒精混合液（乙醚 2份，純酒精 3份）或二甲苯，擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦拭 2—3下即可，（注意向一個(gè)方向擦拭）。 

5．將各部分還原，轉動(dòng)物鏡轉換器，使物鏡頭不與載物臺通光孔相對，而是成八字形位置，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，再將載物臺下降至最低，用一個(gè)干凈手帕將接目鏡罩好，以免目鏡頭沾污灰塵。最后用柔軟紗布清潔載物臺等機械部分，然后將顯微鏡放回柜內或鏡箱中。 

實(shí)驗結果及討論 

1．實(shí)驗結果 

(1) 繪出酵母菌、枯草芽孢桿菌形態(tài)圖。 

(2) 鑒別酵母菌的死活。 

2．討論 

    針對實(shí)驗原理、步驟、現象進(jìn)行討論。

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