實(shí)驗：稀釋平板計數法

(3) 無(wú)菌水：取 6支試管，分別裝入 4.5m1 蒸餾水，加棉塞，滅菌。 

2．樣品稀釋液的制備 

3．平板接種培養 

    平板接種培養有澆注平板培養法和涂布平板培養法兩種方法。 

(1) 澆注平板培養法 

1) 取樣 

                                              -4   -5        -6 
    用三支 1ml 無(wú)菌吸管分別吸取 10 、10 、和 10  的稀釋菌懸液各 1ml，對號放入編好號的無(wú)菌平皿中，每個(gè)平皿放 0.2ml。 

    不要用 1ml 吸管每次只靠吸管尖部吸 0.2ml 稀釋菌液放入平皿中，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復平板間的操作誤差。 

2) 倒平板 

    盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒人融化后冷卻至 45℃左右的培養基約 15 毫升／平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養基與菌液混合均勻，而又不使培養基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。待培養基凝固后，將平板倒置于 37℃恒溫培養箱中培養。 

    由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養皿后，應盡快倒入融化并己冷卻至 45℃左右的培養基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長(cháng)成的菌落連在一起，影響計數。

(2) 涂布平板計數法： 

    平板菌落計數法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將培養基融化后倒平板，待凝固后編號，并于 37℃左右的溫箱中烘烤 30min，或在超靜工作臺上適當吹干，然后用無(wú)菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗臺上 20—30 min，使菌液滲入培養基表層內，然后倒置于的恒溫箱中培養 24—48h。 

    涂布平板用的菌懸液量一般以 0.1ml 較為適宜，如果過(guò)少，菌液不易涂布開(kāi)；過(guò)多則在涂布完后或在培養時(shí)菌液仍會(huì )在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。 

4．計數 

    培養 48h后，取出培養平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數，并按下列公式進(jìn)行計算： 

每毫升中菌落形成單位(cfu)＝同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×5 

    一般選擇每個(gè)平板上長(cháng)有 30—300 個(gè)菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個(gè)重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。實(shí)際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數據統計，減少誤差。   

    平板菌落計數法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個(gè)連續稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養后所出現的平均菌落數在 50個(gè)左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。