組培培養基的選擇

在建立一個(gè)新的實(shí)驗體系時(shí)，為了能研制出一種適合的培養基，最好先由一種已被廣泛使用的基本培養基（如MS培養基或B5培養基）開(kāi)始。當通過(guò)一系列的實(shí)驗，對這種培養基做了某些定性和定量的小變動(dòng)之后，即有可能得到一種能滿(mǎn)足實(shí)驗需要的新培養基，選擇最佳培養基。常用試驗方法主要有單因子試驗、多因子試驗及廣譜實(shí)驗等。 

一、單因子試驗 

單因子試驗中，培養基中其它成分都維持在一般水平上，只變動(dòng)一個(gè)因子，以找出這一因子對試驗的影響和影響的程度，例如MS基本培養基的其它成分和用量都不變，只變動(dòng)NAA用量對某一培養物生根的影響，這種只研究一個(gè)因素的試驗就是單因子試驗。 

生物學(xué)試驗不同于物理學(xué)或化學(xué)試驗，最顯著(zhù)的差別是在生物學(xué)試驗中必需設置對照組與試驗組，試驗組可以有一組或幾組，隨試驗的復雜性增加，對照組也可能有一組以上。要求對照組與試驗組中的試驗個(gè)體，即植物組織塊或其它培養物，必須在遺傳性、生理狀態(tài)、前培養條件等方面，盡可能完全一致。以保證試驗結果是來(lái)源于試驗因子，而不是由于試驗材料不一致導致的。 

試驗中各處理一般都要設有一定的重復，以取得可靠的試驗結果。隨試驗規模和要求不同，大多每個(gè)項目要有4～10瓶，每瓶至少3塊培養物或3叢小幼苗。 

二、多因子試驗 

對培養基中兩個(gè)或兩個(gè)以上因素進(jìn)行研究的試驗稱(chēng)為多因子實(shí)驗，試驗可采用完全試驗方案，也可選用正交設計方案，完全試驗方案具有均衡完全的特點(diǎn)，各個(gè)因子的每個(gè)水平都相互搭配，構成了所有可能的處理組合，如研究NAA和6-BA的最佳濃度組合，每個(gè)因子各設5個(gè)濃度水平（0、0.5、2.5、5、10μmol/l），這兩種因子各種濃度的所有組合，就構成了一個(gè)具有25項處理的試驗（表3－3）。 

完全試驗方案試驗因子越多，處理數越多，試驗越復雜，消耗的精力、物力越多。為了減少試驗處理，但又能準確全面地獲得試驗信息，通常采用正交試驗。例如，采用正交設計，在使用此表時(shí)就可以安排4個(gè)因子，3種水平的試驗，一共做9種不同搭配的試驗，其結果相當于做了27次種種搭配的試驗。正交試驗雖然是多因素搭配在一起的試驗，但是在試驗結果的分析中，每一種因素所起的作用卻又能夠明白無(wú)誤地表現出來(lái)。因此一次系統的試驗結果，就可以把問(wèn)題分析得清清楚楚，用有限的時(shí)間取得成倍的收獲。在組織培養研究中，可用于同時(shí)探求培養基中適宜的幾種成分的用量，如細胞分裂素、生長(cháng)素、糖和其它成分的用量。 

三、逐步添加和逐步排除的試驗方法 

在植物組織分化與再生的研究中，在沒(méi)有取得可靠的分化與再生之前，往往添加各種有機營(yíng)養成分，而在取得了穩定的再生之后，就可以逐步減少這些成分。在逐步添加時(shí)是使試驗成功，在逐步減少時(shí)是縮小范圍，以便找到最有影響力的因子，或是為了實(shí)用上的需要竭力使培養基簡(jiǎn)化，以降低成本和利于推廣。在尋求最佳激素配比時(shí)，也經(jīng)常用到這種加加減減的簡(jiǎn)單方法。 

四、廣譜實(shí)驗法

 在廣譜實(shí)驗法中，把培養基中所有組分分為4大類(lèi)：無(wú)機鹽、有機營(yíng)養物質(zhì)（蔗糖、氨基酸和肌醇等）、生長(cháng)素、細胞分裂素。對每一類(lèi)物質(zhì)選定低（L）、中（M）、和高（H）3個(gè)濃度。4類(lèi)物質(zhì)各3種濃度的自由組合即構成了一項包括81個(gè)處理的實(shí)驗。在這81個(gè)處理中最好的一個(gè)可用4個(gè)字母表示。例如，一個(gè)包含中等濃度無(wú)機鹽，低濃度生長(cháng)素、中等濃度細胞分裂素和高濃度有機營(yíng)養物質(zhì)的處理即可表示為MLMH。達到這個(gè)階段，再試用不同類(lèi)型的生長(cháng)素和細胞分裂素即可找到培養基的最佳配方。這是因為不同類(lèi)型的生長(cháng)素和細胞分裂素對不同植物的活性有所不同。

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