海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
實(shí)驗目的
1．了解消毒和滅菌的原理。.
2．掌握常用的滅菌方法。
實(shí)驗內容
1．學(xué)習干熱滅菌的操作技術(shù)。
2．學(xué)習高壓蒸氣滅菌的操作方法。
實(shí)驗原理
滅菌是指殺滅物體中所有微生物的繁殖體和芽孢的過(guò)程。消毒是指用物理、化學(xué)或生物的方法殺死病原微生物的過(guò)程。
滅菌的原理就是使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子發(fā)生變性，從而達到滅菌的作用，實(shí)驗室中最常用的就是干熱滅菌和濕熱滅菌。
干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。細胞內的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當環(huán)境和細胞內含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160～170℃），時(shí)間長(cháng) （1～2h）。但干熱滅菌溫度不能超過(guò) 180℃。否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì )燒焦，甚至引起燃燒。
高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續加熱，此時(shí)由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于 100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。
在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二是濕熱的穿透力比干熱大，三是濕熱的蒸氣有潛熱存在。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。
實(shí)驗器材
實(shí)驗一所配制的培養基，培養皿，培養皿，試管，吸管，電熱干燥箱、手提式高壓滅菌鍋等。
實(shí)驗步驟
1．高壓蒸氣滅菌
(1) 首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
(2) 放回內層鍋，并裝入待滅菌物品 （培養基等）。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果，三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透人棉塞。
(3) 加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內。再以?xún)蓛蓪ΨQ(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺拴，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
(4) 用電護或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所得壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。
(5) 滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至“0”時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。
2．干熱滅菌
(1) 裝入待滅菌物品
將包好的待滅菌物品（培養皿，試管，吸管等）放入電烘箱內，關(guān)好箱門(mén)。
(2) 升溫
接通電源，撥動(dòng)開(kāi)關(guān)，打開(kāi)電烘箱排氣孔，旋動(dòng)恒溫調節器至綠燈亮，讓溫度逐漸上升。當溫度升至 100℃時(shí)，關(guān)閉排氣孔。在升溫過(guò)程中，如果紅燈熄滅，綠燈亮，表示箱內停止加溫，此時(shí)如果還未達到所需的 160～170℃溫度，則需轉動(dòng)調節器使紅燈再亮，如此反復調節，直至達到所需溫度。
(3) 恒溫
當溫度升到 160～170℃時(shí)，借恒溫調節器的自動(dòng)控制，保持此溫度 2h。
(4) 降溫
切斷電源、自然降溫。
(5) 開(kāi)箱取物
待電烘箱內溫度降到 70℃以下后，打開(kāi)箱門(mén)，取出滅菌物品。
實(shí)驗結果及討論
針對實(shí)驗原理、步驟、現象進(jìn)行討論。
實(shí)驗作業(yè)
1．在干熱滅菌操作過(guò)程中應注意哪些問(wèn)題，為什么？
2．為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需要的溫度高，時(shí)間長(cháng)？
3．高壓蒸氣滅菌開(kāi)始之前，為什么要將鍋內冷空氣排盡?滅菌完畢后，為什么待壓力降至“0”時(shí)才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物?
4．在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，怎樣杜絕一切不安全的因素？
上一篇：實(shí)驗 微生物數量的測定
