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培養基在任何一個(gè)微生物實(shí)驗室中都起到關(guān)鍵的作用，它廣泛用于不同病原微生物的分離、鑒定和藥物敏感性測定。大多數實(shí)驗室經(jīng)常自己制備培養基用于診斷和研究。但是為確保培養基的質(zhì)量并能夠提供令人滿(mǎn)足的結果，適當的質(zhì)量治理系統是必要的。為了這個(gè)目的，制備好的培養基在使用之前應檢查幾個(gè)參數。
本文的目的就為確保培養基質(zhì)量對需要考慮的參數及所需試驗進(jìn)行討論，并根據需要評價(jià)的參數把培養基質(zhì)控的程序分為幾個(gè)部分。
一、原材料參數
培養基的質(zhì)量直接依靠于用來(lái)制備培養基的原材料的質(zhì)量。水是制備培養基最主要的原材料，需要檢測的參數有銅離子的含量，導電性和pH。最理想的情況應該是水中不含銅離子，由于它抑制微生物的生長(cháng)。導電性應該小于15μS(微西門(mén)子)。水的pH應偏酸，但是不能小于5.1[1]。
傾倒培養基所用的帶蓋培養皿也是一個(gè)重要的因素。一般培養皿是經(jīng)環(huán)氧乙烯(EtO)滅菌或是γ射線(xiàn)照射滅菌的。假如是用EtO滅菌的應該檢測殘余的EtO毒性，由于它可能影響微生物的生長(cháng)。EtO可以用標準的氣相色譜的方法測定，其最大的答應殘余量為1μg/g。如使用玻璃器皿只可用硼硅酸鹽的，由于碳酸鹽玻璃可以將堿瀝濾到培養基中。
培養基的制備中還要用到很多添加劑，其中最重要的是血。所以血的質(zhì)量對含血培養基的質(zhì)量起至關(guān)重要的作用。在制備培養基之前應該小心檢查血的無(wú)菌性、同質(zhì)性、粘性和顏色。對于其它的添加劑，應該考慮分析的證實(shí)書(shū)和滅菌情況。
二、滅菌參數：
培養基滅菌在培養基的質(zhì)量中具有重要作用。一般用自動(dòng)高壓鍋進(jìn)行培養基滅菌。但是，高壓的時(shí)間和培養基的量要嚴格控制。復合培養基經(jīng)熱處理可能由于直接的熱降解或者是成分之間的反應可能造成營(yíng)養成分的丟失。所以?xún)?yōu)化加熱過(guò)程把熱損失降到最小是非常重要的。建議使用的循環(huán)是第1階段：20～121℃，第2階段：<100～121℃，第3階段：121～121℃，第4階段：121～80℃。
一次消毒的培養基體積應較少，最好是2升。常規應用指示劑監測滅菌過(guò)程；溫度和壓力應該經(jīng)常檢測�？捎脺缇甘緞┤缟镏甘緞┖�Bowie Dick實(shí)驗檢查滅菌過(guò)程的有效性�？捎蒙镏甘緞┤缡葻嶂狙挎邨U菌監測殺傷芽孢的效果。
三、物理參數
培養基的表面特征可表明質(zhì)量的好壞。應該檢查培養基的物理參數包括：有無(wú)過(guò)量的氣泡或坑，培養皿填充是否均勻，培養皿中的培養基有無(wú)裂開(kāi)、冰凍或結晶。
所有上述提到的參數可以通過(guò)肉眼檢查。但是培養基填充的均勻程度、培養基的厚度可以在4個(gè)點(diǎn)檢查。這是4點(diǎn)是指培養皿兩個(gè)成恰當的角度的直徑的兩個(gè)端點(diǎn)，這樣可同時(shí)檢測到四個(gè)面。記錄4個(gè)點(diǎn)的厚度并計算均勻厚度。培養皿的厚度以均勻厚度表示，應該在4.0± 0.2 mm之內。
培養基的pH值也是一個(gè)必須要檢測的重要物理參數�？赏ㄟ^(guò)用標準的用標準液矯正過(guò)的pH計丈量制備好的待高壓的培養基確定。
四、微生物參數
生長(cháng)支持特性是培養基質(zhì)控中最重要的參數，需要用標準的接種方法進(jìn)行定性定量檢測。并且在測定新的批號時(shí)，應該同時(shí)接種新批號和舊批號。
臨床實(shí)驗室標準國家委員會(huì )（NCCLS）已經(jīng)為各種培養基所用質(zhì)控微生物的理想接種濃度和預期的結果列出了一些指導原則。每種培養基的接種可按如下方法預備：
質(zhì)控微生物接種于大豆酪蛋白消化(SCD)肉湯培養基中，孵育4小時(shí)獲得相當于0.5個(gè)麥氏標準管的濃度的細菌。這種標準濃度的細菌懸液應該能獲得107-108cfu/mL（625nm的吸光度為0.08～0.1）。選擇性培養基和非選擇性培養基應分別接種10uL 10倍和100倍普通生理鹽水或SCD肉湯稀釋的菌液。這些稀釋的菌液用來(lái)評估價(jià)培養基的生長(cháng)支持特性。每一種接種物做雙份接種。接種后將培養皿放置在37°C 24小時(shí)，觀(guān)察菌落的特性和生長(cháng)特性。結果報告可在如下表格中填寫(xiě)有無(wú)生長(cháng)以及生長(cháng)特性。（見(jiàn)表1）
實(shí)際上，盡對的微生物生長(cháng)的測定或者耗時(shí)的或者需要特殊的儀器設備。菌落大小可以用來(lái)表明生長(cháng)特性，但也是不敏感的指標。菌落特征的觀(guān)察是主觀(guān)的，且難以記錄。
像流行病學(xué)方法及可提供可比較數據的比例方法適合于常規的培養基微生物培養特性的質(zhì)量控制，可用于檢測培養基的生長(cháng)和抑制特性。
五、流行病學(xué)方法
這是一種簡(jiǎn)單的數學(xué)方法。同時(shí)測定盡對生長(cháng)指數（AGI）和相對生長(cháng)指數（RGI）。這種方法基于將接種物不斷劃線(xiàn)直至細菌消失。這種方法可以用來(lái)比較不同批號的培養基也可以用來(lái)比較選擇性和非選擇性培養基。
這種方法是將一滿(mǎn)菌環(huán)的選定的實(shí)驗菌株接種到5ml心腦浸汁肉湯培養基中孵育4小時(shí)。將含有培養基的培養皿分成4部分并按如圖所示方法劃線(xiàn)。
用一個(gè)微升菌環(huán)挑一滿(mǎn)環(huán)培養物并按A1, B1, C1, D1, A2, B2 .. 直到 D5的方法劃線(xiàn)，中間不用燒菌環(huán)也不用再挑菌液。用同樣方法在質(zhì)控平板上操縱。孵育后記錄測試板和質(zhì)控板出現培養物的最后的點(diǎn)。這就是測試板和質(zhì)控板的終點(diǎn)。這些結果可以用來(lái)計算培養基的AGI和RGI。AGI通過(guò)記錄終點(diǎn)得到（見(jiàn)表2）。
RGI是測試板和質(zhì)控板AGI的比值。
RGI隨著(zhù)培養基的用途而變化。為了檢查有效性，RGI應接近100%。但是為了檢測抑制性，RGI應接近0%。選擇性瓊脂的特性可以用一個(gè)用來(lái)測試分離特性的菌株和一個(gè)用來(lái)測試抑制特性的菌株進(jìn)行測定。
六、生產(chǎn)率(PR)
測定培養基的生產(chǎn)率是測定代測培養基相對于質(zhì)控培養基的特性的另一種方法，指控培養基應該是一種營(yíng)養瓊脂如胰蛋白胨大豆瓊脂培養基(TSA)。所用接種物必須相同，PR通過(guò)計算測試和質(zhì)控培養基上的克隆數得到。
PR=測試板上的克隆數×稀釋倍數
質(zhì)控板上的克隆數×稀釋倍數
這種方法是對Miles和Misra技術(shù)的改進(jìn)。將測試用的培養物過(guò)夜培養，用緩沖蛋白胨水做10倍倍比稀釋。將測試板分成4等份，并且每一部分標記好所用培養物的稀釋倍數。（如圖2）
從高濃度開(kāi)始，將相應稀釋倍數的培養物放在相應的1/4圓內。并對質(zhì)控板做同樣的操縱。將每滴培養物在相應的1/4圓內涂布，并在37°C培養18小時(shí)。計數測試和質(zhì)控板最低稀釋倍數的克隆數。
七、污染參數
這也是決定培養基質(zhì)量非常重要的因素，一批培養基在使用之前必須仔細檢查污染情況。建議將一批制備的培養基在室溫放3天以檢查污染情況�；蛘邚囊慌鷾y試培養基中拿出兩個(gè)放在孵箱內37°C孵育24小時(shí)。經(jīng)必要的孵育后，檢查有無(wú)生長(cháng)。假如有生長(cháng)，從同一批制備的培養基中再拿出兩個(gè)，重復上述過(guò)程一次。假如再次出現污染，表明制備的這一批培養基有污染。建議當一批培養基污染超過(guò)10%應棄往。
八、凝膠強度參數
凝膠強度表明培養基中瓊脂凝固的程度。凝膠強度通過(guò)一個(gè)三角架進(jìn)行丈量，這個(gè)三角架中心有一個(gè)棒，用來(lái)給瓊脂加壓。這個(gè)棒的底端有一個(gè)圓形的部分，用來(lái)放在培養基表面。棒的頂端有一個(gè)平臺，平臺上可以放定量的砝碼。中心棒的球形的部分放在培養基上，砝碼一個(gè)一個(gè)地放在上面的平臺上并觀(guān)察一段時(shí)間。直到瓊脂在中心棒的壓力下斷裂。計算瓊脂的強度時(shí)須忽略中心棒的重量。中心棒施加在瓊脂表面的壓力可以通過(guò)下面的公式計算：Wpr2。公式中的w為放在平臺上的砝碼的重量，r為中心棒底端球形部分的半徑。P=3.14。大約300-500dynes/cm2的凝膠強度是比較滿(mǎn)足的。
九、現狀
用于臨床微生物實(shí)驗室培養基的質(zhì)控對從感染的病人體內獲得正確的可解釋的分離菌株是非常關(guān)鍵的。用標準的方法檢測培養基可以節省時(shí)間和資源。最近在安大略湖質(zhì)控應用情況的調查發(fā)現人們根本沒(méi)有按NC CLS QA的建議往做。而且建議使用的ATCC菌株只有一半的實(shí)驗室使用。培養基的批失敗率在0.10%-9.87%之間（均勻1.01%）。失敗的原因有不生長(cháng)（39.9%），不抑制（18.6%），非無(wú)菌（17.9%），溶血（7.2%）和表面破壞（16.3%）。
另外一項調查發(fā)現批失敗率較小(0.5%)。Krisher等指出109個(gè)被調查的實(shí)驗室中有41個(gè)使用50% 或更少NCCLS M22-A2提供的信息。在最近的NCCLS M22-A3文件中將培養基按質(zhì)控失敗率進(jìn)行分類(lèi)。失敗率大于0.5%的培養基需要使用者做全部的質(zhì)控，被稱(chēng)之為非免除培養基，如營(yíng)養肉湯，Todd-Hewitt 肉湯, 麥康凱山梨醇瓊脂, 含有IsoVitaleX 的巧克力瓊脂, (r)Campylobacter血瓊脂,含有5%羊血和環(huán)己酰亞胺的心腦浸液(BHI)。失敗率小于或即是0.5%的培養基是免除培養基，建議只做最低限度的質(zhì)控�？梢怨澥”惧X(qián)避免不必要的重復質(zhì)控。
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