免疫印跡法檢測幽門(mén)螺桿菌抗體結果分析

【摘要】  目的 評價(jià)免疫印跡法檢測Ⅰ型和Ⅱ型幽門(mén)螺桿菌抗體的價(jià)值。 方法 采用免疫印跡法對門(mén)診隨診患兒227例進(jìn)行分型檢測。 結果 檢出HP陽(yáng)性85例,陽(yáng)性率為37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%。 結論 免疫印跡法檢測幽門(mén)螺桿菌抗體具有較高的敏感性和特異性。方法簡(jiǎn)單，時(shí)間短,對臨床治療有重要的指導意義。

【關(guān)鍵詞】  幽門(mén)螺桿菌 免疫印跡法 空泡毒素 細胞毒素相關(guān)基因A

幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter,簡(jiǎn)稱(chēng)HP）是慢性胃炎﹑消化性潰瘍和非潰瘍性消化不良的重要因素，是胃癌的危險因子。HP在全球人群的感染率超過(guò)50%，而且隨著(zhù)年齡的增加有遞增趨勢［1］。表達空泡毒素（VacA）蛋白和細胞毒素相關(guān)基因A（CagA）的HP菌株致病力強。本文對患兒血清用免疫印跡法進(jìn)行檢測并分型,探討不同型別HP與患者的關(guān)系，及時(shí)指導臨床治療。

　　1  材料與方法

　　1．1  樣本  于2006年8月～2007年8月到我院門(mén)診患兒，抽血2ml，留取血清待查。

　　1．2  試劑與方法  采用免疫印跡法進(jìn)行分型，試劑盒由上海元谷科技發(fā)展有限公司提供。本試劑原理是先將幽門(mén)螺桿菌的混合抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，按分子量大小不同分開(kāi)，再將其轉移至硝酸纖維膜，如果被檢血清有相應抗體，應用酶聯(lián)免疫吸附反應，就會(huì )在抗原的相應位置出現顯色區帶，即可判斷HP感染類(lèi)型。

　　1．3  抗體判斷  將印跡膜上端起始線(xiàn)與標準帶起始線(xiàn)對齊，在對應位置出現帶型既可判斷為相應的抗體:①128KD﹑116KD出現顯色帶或128KD單獨出現，可同時(shí)伴有110KD顯色判斷為CagA（+）抗體；②95KD﹑91KD出現顯色或95KD單獨出現，可同時(shí)伴有87KD顯色帶判斷為VacA（+）抗體；③66KD出現顯色帶判斷為尿素酶B(UreB)(+)抗體;④30KD出現顯色帶判斷為尿素酶A(UreA)(+)抗體。

　　1．4  分析結果  ①CagA或VacA抗體同時(shí)陽(yáng)性或任意一種陽(yáng)性，為Ⅰ型HP感染；②僅出現尿素酶A和尿素酶B抗體陽(yáng)性，為Ⅱ型HP感染；③CagA， VacA及Ureas三種抗體陰性，既為HP抗體陰性。

　　2  結果

　　2.1  227例患兒  HP感染85例，陽(yáng)性率為37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%,見(jiàn)表1。

　　表1  227例患兒HP感染結果（略）

　　2.2  不同年齡段HP感染情況  見(jiàn)表2。

　　表2  1～14歲不同年齡段HP感染情況（略）

　　3  討論
   
　　目前臨床上根據HP菌株及是否表達相應蛋白將HP分為兩種類(lèi)型：Ⅰ型為產(chǎn)細胞毒素HP菌株，能產(chǎn)生空泡毒素和細胞毒素相關(guān)蛋白，其致病力強，能導致廣泛的炎癥，Ⅱ型為不能產(chǎn)生細胞毒素的HP，不含細胞毒素相關(guān)基因A(CagA)，不表達VacA毒素和CagA蛋白，這類(lèi)菌株毒性小，感染后一般僅引起輕度慢性淺表性胃炎而無(wú)明顯的臨床癥狀［2］。據文獻［3,4］報道，CagA蛋白是Ⅰ型HP致病性的標志物，現已確認HP是慢性活動(dòng)性胃炎﹑消化性潰瘍﹑胃黏相關(guān)淋巴組織（MALT）淋巴瘤和胃癌的致病因素。1994年世界衛生組織/國際癌癥研究機構（WHO/IARC）將幽門(mén)螺桿菌定為Ⅰ型致癌原。HP作為胃癌的Ⅰ類(lèi)致癌因子，其中CagA與 VacA是在致癌過(guò)程中關(guān)鍵的毒力因子。HP穿透粘液層在胃上皮細胞表面定居，對胃上皮細胞和胃粘膜屏障等造成破壞作用，刺激上皮細胞增殖，改變增殖與凋亡的關(guān)系。VacA可使上皮細胞空泡樣變性﹑損傷﹑壞死及潰瘍，CagA本身無(wú)細胞毒性，但與VacA的轉錄等功能有關(guān)。另外，我國HP成人感染率已達60%～80%［5］,血清學(xué)檢查絕大部分均為陽(yáng)性，因此，HP進(jìn)行分型檢測特別重要，能及時(shí)指導臨床治療。本文通過(guò)免疫印跡法對227例患兒進(jìn)行CagA、VacA、UreA、UreB抗體檢測，結果顯示：HP感染85例，陽(yáng)性率為37.44%，略低于成人感染率［5］，而且HP感染率隨著(zhù)年齡增加而增加，與文獻［1］報道基本一致。免疫印跡法是一種可靠的診斷HP感染的非入侵性方法,它的特異性和敏感性都較高且方法簡(jiǎn)單,且能定性分析蛋白質(zhì)各組分,與其它方法相比,具有操作簡(jiǎn)單易行不需要昂貴的儀器,安全準確等優(yōu)點(diǎn),特別適合不適宜進(jìn)行胃鏡檢查或不需要胃鏡檢查的患者,病人易于接受,及時(shí)指導臨床治療并且可用于流行病學(xué)調查。

【參考文獻】
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