細菌的芽孢染色

某些細菌在其發(fā)育的一定階段可以形成一個(gè)內生孢子，即為芽孢。芽孢形成后并不脫離原細菌菌體，它的形狀、大小和在菌體的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌體中脫落出來(lái)。芽孢結構上的特點(diǎn)是壁厚和細胞質(zhì)濃厚，所以不易著(zhù)色，通常多采用著(zhù)色力強的染色劑和用加熱等手段促使芽孢著(zhù)色，并利用復染的方法對比原細菌菌體和芽孢，才易于在顯微鏡下看到它們。但是，若用簡(jiǎn)單染色法使菌體著(zhù)色而芽孢無(wú)色也可以襯托出芽孢的形狀、大小和位置。
【實(shí)驗目的】
掌握細菌芽孢染色的方法。
【實(shí)驗原理】
細菌的芽孢含水量少，脂肪含量高，芽孢壁較厚，對染料的透性差，不易著(zhù)色，但是一旦著(zhù)色又難以脫色。
通常，芽孢染色采用弱堿性染料孔雀綠在加熱的條件下進(jìn)行。染色完畢，用蒸餾水沖洗。因孔雀綠是弱堿性染料，與菌體結合力較差，因此易被水沖洗掉，而進(jìn)入芽孢的孔雀綠卻難于溶出。水洗后，再用一種呈紅色的堿性染料復染，使菌體和芽孢呈現不同顏色。
【實(shí)驗材料、藥品及器具】
1、菌種 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）
2、染液 孔雀綠染液
藏花紅染液
3、器皿 顯微鏡、酒精燈、鑷子、洗凈的載玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、玻璃紅、洗瓶裝蒸餾水、接種環(huán)。
【實(shí)驗步驟】
1、取培養24h左右的枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌分別涂片、干燥、固定。
2、在涂片部分用吸水紙條蓋住，然后向紙條滴加孔雀綠液至飽和。
3、將涂片逐漸加熱至微冒蒸汽并不時(shí)添加染液以防止吸水紙條干燥。染色
2-8 分鐘。
4、除去吸水紙條，用蒸餾水輕輕沖洗掉多余染液。
5、用藏花紅染液復染30~60S。
6、水洗，風(fēng)干或烘干后鏡檢。
【實(shí)驗結果】
1、首先用低倍鏡，再用油浸鏡檢查制片，注意芽孢的顏色和菌體的顏色。
2、繪制芽孢圖。注意芽孢在菌體內的位置、大小和形狀并繪制游離芽孢形態(tài)圖。
【思考題】
1、為什么經(jīng)孔雀綠染色后，水洗再復染紅色染液只能染上菌體？
2、用革蘭氏染色能否看到芽孢，為什么？

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