細菌的單染技術(shù)

簡(jiǎn)單染色通常只用一種染色劑，使細菌整個(gè)細胞染上顏色。但看不清結構。所以只便于檢查細菌的形態(tài)、大小和排列方式等。
【實(shí)驗目的】
1、掌握單染色的操作技術(shù)
2、觀(guān)察細菌的基本形態(tài)
【實(shí)驗原理】
單染色即用單純的種染料進(jìn)行染色，多數采用美藍、結晶紫或石碳酸復紅等堿性染料。此法僅能顯示細胞的外部形態(tài)，而不能辨別其內部結構。染色前必須將細胞固定，其目的是殺死細菌，并使它粘附在載玻片上。此外，還可以增加菌體對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。無(wú)論用哪種方法都應盡量使細菌維持原有的形態(tài)，防止細胞膨脹或收縮。
【實(shí)驗材料、藥品及器具】
1、菌種 大腸桿菌（Escherichia coli）
枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）
2、染色液 石炭酸品紅染色或結晶紫染色液（Stining Solutions）
3、無(wú)菌水
4、洗瓶裝蒸餾水
5、洗凈的載玻片（Slicle）5片
6、顯微鏡、香柏油、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯
【實(shí)驗步驟】
1、涂片：取一片干凈無(wú)油載玻片，在其中央滴一滴無(wú)菌水，然后用接種環(huán)以無(wú)菌操作方法取少許培養好的大腸桿菌，放在載玻片的水滴中涂勻，注意菌量不宜過(guò)多，否則，不易看清單個(gè)菌體。
2、固定：將涂好的玻片在空氣中風(fēng)干或火焰上通過(guò)3～4 次，使水份蒸發(fā)，此時(shí)細菌菌體緊貼在玻片上。
3、染色：用石炭酸品紅或結晶紫染色劑30~60S，然后用洗瓶輕輕沖洗染色劑（注意不要直接沖洗染色部位），直至無(wú)多余的染液，晾干或用吸水紙從旁吸干或用微火烘干。
4、用同樣方法將枯草芽孢桿菌制作一張涂片。
5、鏡檢：首先在低倍鏡下找到物像，然后在涂膜中央滴一滴香柏油，換成油浸鏡觀(guān)察兩個(gè)菌種的形態(tài)和排列。
6、去除油鏡上的香柏油：先用干凈的擦鏡紙擦2-3 次，再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油，最后用擦鏡紙擦干。擦鏡頭時(shí)應順著(zhù)鏡頭直徑方向擦，不要沿著(zhù)圓周方向擦。
【實(shí)驗結果】
1、繪制觀(guān)察到大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的形態(tài)圖，并注明放大倍數。
2、用文字描述兩菌株的細胞形態(tài)。
【思考題】
1、涂片在染色前為什么要先進(jìn)行固定？固定時(shí)應注意什么問(wèn)題？
2、制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀(guān)察？
3、制片時(shí)應注意哪些事項？為什么？

上一篇：細菌的生化反應

下一篇：細菌的革蘭氏染色