細菌的生化反應

細菌的新陳代謝都是在各種不同酶的催化下進(jìn)行的，由于不同細菌的酶系統不同，其對營(yíng)養物質(zhì)的分解能力亦有差異，代謝產(chǎn)物亦不相同。故可利用生化反應的方法，測定細菌的各種代謝產(chǎn)物，借以區別和鑒定細菌。
一、單糖發(fā)酵試驗
不同細菌具有發(fā)酵不同糖類(lèi)的酶，因而分解糖類(lèi)的能力各不相同。有的能分解某些糖產(chǎn)酸，有的則既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,有的則不能分解,據此可以鑒別細菌。常用的糖（醇）有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖等。
【材料】
1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌18－24小時(shí)瓊脂斜面培養物。
2、培養基：乳糖、葡萄糖液體發(fā)酵管。
【方法】
1、將大腸桿菌、傷寒桿菌分別以穿刺法接種于乳糖及葡萄糖發(fā)酵管中，經(jīng)37℃孵育18－24小時(shí)后觀(guān)察結果。 2、如細菌生長(cháng)，則培養基變混濁；糖是否被分解，根據以下現象判定：
（1）指示劑仍為紫色不變，表示細菌不分解該糖，用“－”表示；
（2）指示劑由紫變黃，無(wú)氣體產(chǎn)生，表示細菌分解該糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，用“+”表示；
（3）指示劑由紫變黃，并有氣體產(chǎn)生，表示細菌分解該糖，產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，用“⊕”表示。
注：液體單糖發(fā)酵管是在無(wú)糖肉湯或蛋白胨水中加入1％糖類(lèi)，指示劑常用溴甲酚紫，pH感應界為5.6-6.6，色調由黃→紫。
【結果】 葡萄糖 乳糖
大腸桿菌 ⊕ ⊕
傷寒桿菌 ＋ －
二、吲哚（靛基質(zhì)）試驗
某些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚（靛基質(zhì)）。吲哚本身無(wú)色，不能直接觀(guān)察，如與吲哚試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用，形成紅色的玫瑰吲哚，即為吲哚試驗陽(yáng)性。本試驗常用于鑒別某些腸道桿菌。
【材料】
1、菌種：大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌瓊脂斜面18－24小時(shí)培養物。
2、培養基：蛋白胨水培養基。
3、吲哚試劑。
【方法】
1、分別接種大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌于2支蛋白胨水培養基中。
2、37℃孵育24－48小時(shí)后取出，沿管壁加入2－3滴吲哚試劑于液面上，振搖試管使試劑與培養液混合，然后靜置數分種，觀(guān)看是否變色。陽(yáng)性者可見(jiàn)上層試劑呈玫瑰紅色，仍呈黃色者為陰性。
【結果】 大腸桿菌 +， 產(chǎn)生桿菌 -
三、硫化氫試驗：
某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成H2So 產(chǎn)生的H２S遇培養基中的鉛或鐵離子，則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀，黑褐色沉淀物越多，表示生成的H２S量越多，因此可間接地檢測細菌是否產(chǎn)生H_２S。
【材料】
1、菌種：大腸桿菌、變形桿菌18－24小時(shí)斜面培養物。
2、培養基：醋酸鉛培養基。
【方法】
1、分別穿刺接種大腸桿菌、變形桿菌于2支醋酸鉛培養基內。
2、37℃孵育24小時(shí)后觀(guān)察，穿刺部位呈黑褐色者為陽(yáng)性，不變顏色者為陰性。
【結果】大腸桿菌 -，變形桿菌 +
四、尿素酶試驗
某些細菌如變形桿菌具有尿素酶，因此，在含有尿素的培養基中，能分解尿素產(chǎn)生氨，使培養基變堿，此時(shí)培養基中的酚紅指示劑顯紅色，借此可鑒別細菌。
【材料】
1、菌種：大腸桿菌、變形桿菌的18～24小時(shí)斜面培養物。
2、培養基：尿素培養基。
【方法】
1、分別將大腸桿菌、變形桿菌接種于兩支尿素培養基上。
2、37℃孵育24小時(shí)觀(guān)察結果，尿素培養基變紅色者為陽(yáng)性，顏色不變?yōu)殛幮浴?
【結果】大腸桿菌 -，變形桿菌 +
五、細菌色素的產(chǎn)生：
【材料】普通瓊脂平板，綠膿桿菌，金黃色葡萄球菌
【方法】將綠膿桿菌，金黃色葡萄球菌分別接種于普通瓊脂平板上，經(jīng)37℃24小時(shí)孵育后，觀(guān)察結果。
注意菌落顏色及周?chē)�培養基的顏色。

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