糞鏈球菌及其檢驗

一、生物學(xué)性狀

　　糞鏈球菌菌形圓或橢圓，可順鏈的方向延長(cháng),直徑0.5-1.0微米,大多數成雙或短鏈狀排列,通常不運動(dòng)。在豐富培養基上菌落大而光滑，直徑1-2mm，全緣，罕見(jiàn)色素。其營(yíng)養要求低，在普通營(yíng)養瓊脂上也可生長(cháng)。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉湯培養基中生長(cháng)，并能耐65℃ 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇，不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡(jiǎn)單的培養基上生長(cháng)不需葉酸。

　　　近年來(lái)，DNA-DNA雜交結果顯示，腸球菌與鏈球菌屬同源程度低，故有學(xué)者建議另立腸球菌屬，與人類(lèi)有關(guān)者為糞腸球菌（E.faecalis）和屎腸球菌（E.faecium）。

　　　糞鏈球菌引起的感染有尿路感染、化膿性腹部感染、敗血癥、心內膜炎和腹瀉發(fā)燒等。其中敗血癥最常繼發(fā)于生殖泌尿性感染，皮膚、膽道、腸道等感染也可作為原發(fā)病灶。從天然乳清培養物中分離的菌株，能產(chǎn)生一種細菌素，叫腸球菌素（Enterocin），對單增李斯特氏菌有殺滅作用。

　　糞鏈球菌為條件致病菌，它來(lái)源于人和溫血動(dòng)物的糞便，偶爾出現于感染的尿道及急性心內膜炎。它能夠通過(guò)食品對人類(lèi)造成感染，因而常見(jiàn)于許多食品，如火腿腸、炸肉丸、布丁及經(jīng)過(guò)巴氏消毒的牛奶等，糞鏈球菌進(jìn)入食物鏈的主要原因是不衛生的加工條件所致的，一般與直接的糞便感染無(wú)關(guān)。糞鏈球菌引起的感染大多是由于它的侵襲所造成，感染劑量較高，一般大于10⁷個(gè)細菌。人、禽感染率最高，亦見(jiàn)于豬、牛、馬、山羊、綿羊及兔。

1、檢驗：

　　樣品制備 取25g或25mL樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，制成1：10樣品稀釋液。根據樣品的污染程度，制成適當的10倍遞增稀釋液。

　　a.多管法：

　　用適當的稀釋液接種一套疊氮化鈉葡萄糖肉湯管。接種量為1mL或以下的，使用10mL單料管；接種量為10mL，使用10mL雙料管。35℃培養24-48h，并檢查記錄各管的混濁情況。用接種環(huán)將渾濁管中的培養物劃線(xiàn)于PSE平板上，倒置平板于36℃培養24h。平板上出現的帶棕色環(huán)的黑色菌落，確證為糞鏈球菌。根據接種的樣品量和確證為是糞鏈球菌的管數，查MPN表，報告每克樣品中的糞鏈球菌MPN值。

　　b.濾膜法：

　　傾注融化的4-5mL的KF瓊脂于平板上，若平板表面有氣泡，可用火焰灼除。根據樣品的污染程度，使用樣液的量為100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用滅菌濾膜過(guò)濾樣液，以能在濾膜上生長(cháng)出20-100個(gè)菌落為宜。將濾過(guò)樣液的濾膜緊貼在KF瓊脂培養基表面上，避免出現氣泡。倒置平板于36℃培養48h。糞鏈球菌在KF平板濾膜上形成暗紅色至粉紅色菌落。將典型菌落接種于腦心浸液斜面上，36℃培養48h。用其培養物做過(guò)氧化氫試驗，過(guò)氧化氫濃度為3%，陽(yáng)性反應者為非糞鏈球菌群細菌。將陰性反應者接種于腦心浸液肉湯，置45.5℃培養48h；同樣方式接種一管膽鹽肉湯，置36℃培養3天。在上述兩種情況下生長(cháng)者為糞鏈球菌。選擇生長(cháng)20-100個(gè)菌落的濾膜，根據所使用的樣品量，計算出樣品每克（毫升）中的糞鏈球菌數。

　　c.平板計數法：

　　 取1mL適當稀釋液加入培養皿內，傾入12-15mL的KF或PSE培養基，轉動(dòng)平板充分混合。凝固后置36℃培養，KF平板培養48h，PSE平板培養24h。糞鏈球菌在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌落，邊緣整齊，瓊脂表面下菌落呈橢圓或晶體狀；在PSE平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落。選擇有30-300個(gè)菌落的平板進(jìn)行記數。按糞鏈球菌數/g(mL)報告結果。

2、控制

　　由于糞鏈球菌可通過(guò)食物對人類(lèi)造成感染，所以應從以下幾個(gè)方面加以控制：

　　加強生產(chǎn)區域的衛生管理，由于糞鏈球菌主要來(lái)源于人畜糞便，所以廁所要合理布局，避免糞便直接污染；生產(chǎn)人員要嚴格執行個(gè)人衛生制度。

　　在加工過(guò)程中，嚴格注意每個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的控制，掌握好諸如溫度、水源衛生等要素。