高壓蒸汽滅菌器滅菌效果的驗證

除少數培養基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培養基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無(wú)菌試驗培養基滅菌不徹底，直接關(guān)系到試驗結果。因此必須認真對高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗證。 
  
1．試驗材料
(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus  stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。
(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡。
(3)溴甲酚紫胨水培養基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。
(4)O-150℃留點(diǎn)溫度計。

 2．方法與結果
     將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡(jiǎn)稱(chēng)菌片）用無(wú)菌鑷子放人密封試管中�；瘜W(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。
     留點(diǎn)溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監測后留點(diǎn)溫度計的溫差應存1℃之間，則說(shuō)明滅菌器內的溫度分布是均勻的。
     滅菌后的菌片應在嚴格無(wú)菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養基內56-60℃培養24-48小時(shí)，觀(guān)察顏色變化。如培養基變?yōu)辄S色，說(shuō)明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細菌仍可在培養基中生長(cháng)，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養基顏色不變化仍為紫色，則說(shuō)明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養基內作為陽(yáng)性對照，不加紙片的空白培養基作為陰性對照。
     化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時(shí)，由淡黃色變?yōu)楹谏�。隨著(zhù)顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達到要求�；瘜W(xué)指示卡應在干燥處保存。遇潮會(huì )變色，影響滅菌效果的觀(guān)測。
     高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿(mǎn)載熱穿透力驗證(滿(mǎn)載時(shí)不超過(guò)總體積的2/3)。二種驗證各重復三次，共做六次。
     5個(gè)點(diǎn)六次試驗表明溫度均在121℃，化學(xué)指示卡變黑；程度與對照色一致；培養基均未改變顏色，說(shuō)明高壓蒸氣滅菌效果合格。
     高壓滅菌器屬于強檢儀器，但強檢只是對儀器物理參數的考核。所以做過(guò)強檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個(gè)重要的問(wèn)題。國內市售的手提滅菌器，往往儀器指針達到所需的溫度，但滅菌物品的實(shí)際溫度卻未達到要求。導致滅菌物品不徹底，影響實(shí)驗結果。培養基滅菌不徹底，影響培養基的使用及結果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無(wú)菌效果的驗證是一個(gè)必須引起重視的問(wèn)題。

上一篇：酒精燈和本生燈的正確使用

下一篇：潔凈室空氣滅菌方法的效果比較