水中總大腸菌群的檢測及分離鑒定

摘 要：本文對五種含飲用水、水源水的樣品進(jìn)行了總大腸菌群的檢測；結果從兩份水源水中檢出了大腸菌群，另外三份飲用水樣品則未檢出；并對所檢出的大腸茵群進(jìn)行了分離鑒定，得到艾希氏大腸桿菌、檸檬酸桿茵和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。

關(guān)鍵詞：總大腸菌群發(fā)酵培養 分離鑒定 生化試驗

一、概述

    總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧的，在37℃生長(cháng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵，在24h內產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。該菌與醫學(xué)細菌學(xué)分類(lèi)中的大腸桿菌不同。它包括腸桿科的四個(gè)菌屬：艾希氏菌屬、檸檬酸桿菌、克雪伯氏桿菌以及副腸桿菌屬[1、2]。在飲用水的微生物安全監測中，大腸菌群是水的糞便污染指標菌，以該菌的檢出情況來(lái)表示水中有否糞便污染及其程度。因為糞便中可能會(huì )帶有一些腸道致病菌，所以水中總大腸菌群數的高低，也反映了其對人體健康危害性的大小。

    本文對香洲水廠(chǎng)出廠(chǎng)水、市府飯堂管網(wǎng)水、西江河水和桂山島山水進(jìn)行了總大腸菌群的檢驗。檢驗方法采用多管發(fā)酵法和濾膜法[1]。兩種方法測定結果基本一致。并對檢驗中培養所產(chǎn)生的菌落進(jìn)行了分離鑒定，分離得到3株艾希氏大腸桿菌、2株檸檬酸桿菌和3株產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。

二、檢測

1．儀器

顯微鏡、放大鏡、革蘭氏染色用有關(guān)器材、試管、平皿、刻度吸管、濾膜、無(wú)齒鑷子、抽濾設備、水浴鍋、恒溫箱、水箱及消毒、滅菌用有關(guān)器材。

2．培養基

2．1．多管發(fā)酵法：

2．1．1．初發(fā)酵試驗：乳糖蛋白胨培養液及其三倍濃縮液；

2．1．2．平板分離：品紅亞硫酸鈉培養基；

2．1．3．復發(fā)酵試驗：乳糖蛋白胨培養液。

2．2．濾膜法：

2．2．1．初培養：品紅亞硫酸鈉培養基；

2．2．2．復檢試驗：乳糖蛋白胨培養液。

3．培養條件

3．1．培養溫度：37℃

3．2．需氧條件：常壓空氣下培養

3．3．培養時(shí)間：1～2天

4．結果

    培養特性：在乳糖蛋白胨培養液上培養一天后，西江河水、桂山島山水的初發(fā)酵管中，部分變黃變濁，并伴有氣泡，或出現絮狀沉淀，均帶有糞臭味。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于品紅亞硫酸鈉培養基培養一天后，平板上出現多種菌落，其中有三種典型菌落：紫紅色，帶金屬光澤，圓形，邊緣整齊，凸，潤，1～3mm大��；深紅色，圓形，邊緣整齊，凸，潤，1～3mm大��；淺紅色，中心色稍深，稍園或不規則，扁平，發(fā)粘，2～4mm大小。西江河水、桂山島山水的濾膜在品紅亞硫酸鈉培養基上經(jīng)初培養后，也出現了上述菌落。

    形態(tài)特征：三種典型菌落的生長(cháng)菌呈革蘭氏陰性，無(wú)芽孢，菌體大小約0.5～l×1～3μm，桿狀，兩端鈍圓。其中前面兩種菌落的生長(cháng)菌能運動(dòng)，不形成莢膜；而菌落發(fā)粘的生長(cháng)菌不運動(dòng)，部分可形成莢膜。

    鏡檢后將符合大腸菌群性狀的菌落接種于乳糖蛋白胨培養液，培養一天后，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現象，證實(shí)有大腸菌群存在。檢測結果見(jiàn)表1。

三、分離鑒定

    對河水和山水在檢測中培養產(chǎn)生的三種典型大腸菌菌落進(jìn)行純分離培養檢查。

    1．鑒定培養基

    MFC培養基，煌綠肉湯培養基，西蒙氏檸檬酸鈉瓊脂，氰化鉀肉湯培養基，葡萄糖酸鈉肉湯培養基。

    2．培養條件

    2．1．培養溫度：33℃ 37℃ 44℃

    2．2．需氧條件：常壓空氣下培養

    2．3．培養時(shí)間：1～2天

    3．分離鑒定方法

    將平板分離得到的三種菌落再分別接種于品紅亞硫酸鈉培養基進(jìn)行純培養后．挑紫紅色帶金屬光澤的菌落，移植MFC培養基和煌綠肉湯培養檢查；挑深紅色或紅色無(wú)光澤的菌落移植檸檬酸鈉瓊脂和氰化鉀肉湯培養檢查；挑淺紅色(粘、大)的菌落移植葡萄糖酸鈉肉湯培養檢查：

    4．結果

    從兩份不同樣品中，分離鑒定出3種共8株腸桿菌．其種類(lèi)分布及來(lái)源見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)．由西江河水分離的腸桿菌有：艾希氏大腸桿菌、檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。由桂山島山水分離的腸桿菌有：檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。其形態(tài)特征如1．4中所述。

    培養特性：

    在MFC培養基上培養一天后，艾希氏大腸桿菌菌落l～3mm大�。畧A形．邊緣整齊．凸．潤．藍色，中心色稍深；在煌綠肉湯中培養一天后，產(chǎn)氣。

    檸檬酸桿菌在氰化鉀肉湯中培養兩天后，產(chǎn)氣．醋酸鉛濾紙條顏色變黑：在檸檬酸鈉瓊脂上培養2天后．出現圓潤小的菌落。

    產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌在葡萄糖酸鈉肉湯中培育兩天后．加入Benedict試劑．置于沸水浴中10分鐘后，出現褐色沉淀。

    生化試驗：對所分離的腸桿菌進(jìn)行生化試驗：靛基質(zhì)生成試驗、甲基紅試驗、V.P.試驗、硫化氫產(chǎn)生試驗、明膠液化試驗等。試驗結果見(jiàn)表2。  

四、討論

    采用多管發(fā)酵法和濾膜法檢測飲用水、水源水的總大腸菌群．兩種方法結果基本一致，前者的數值相對較大，可能是因為多管發(fā)酵法采用的MPN法存在正的統計誤差。濾膜法可以除去水樣中最影響細菌生長(cháng)的成

分，對較潔凈的水又可以增加其濾過(guò)量．有利于提高檢測的準確度和精密度，檢測出廠(chǎng)水、管網(wǎng)水等潔凈度高的水特別適用。對于濁度較大的水源水．采用多管發(fā)酵法較為合適。

    西江河水的總大腸菌群數量較多，經(jīng)分離鑒定含有艾希氏大腸桿菌、檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌，這可能是河水前期和近期曾受到動(dòng)物糞便污染。桂山島山水含有少量的大腸桿菌，經(jīng)分離鑒定含有：檸檬桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌，這可能是山水前期曾受到動(dòng)物糞便污染。因此，河水和山水均可能帶有其其他的腸道致病菌，而大腸桿菌在一些情況下也會(huì )導致毒血病和某些炎癥，可見(jiàn)河水和山水均不宜直接作為飲用水使用。

水源水中細菌種類(lèi)繁多，大腸菌群作為糞便污染指標菌而提出來(lái)．艾希氏大腸桿菌因存在于溫血動(dòng)物腸道內，而被稱(chēng)為糞性大腸菌，糞性大腸菌在水源水的監測中已日趨重要：上述三種腸桿菌是大腸群中的常見(jiàn)菌，對其分離鑒定的目的是為了熟悉水中大腸菌群的形態(tài)特征、培養特性及其生化反應。

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