微生物純培養分離法

微生物在自然界中都是混雜地生活在一起，要想研究和利用某種微生物，須把它從混雜的微生物群中分離出來(lái)，以得到只含該種微生物的培養物。微生物學(xué)中，將在實(shí)驗室條件下從一個(gè)細胞或一種細胞群繁殖得到的后代稱(chēng)為純培養（pure culture）。分離純培養的方法通常有以下幾種：

1．稀釋法

（1）平皿傾注法

（2）平板涂布法 預先制備平板。然后制備并吸取適度稀釋的菌液，滴于各平板中央（每皿一滴，約0.05ml），用無(wú)菌刮刀將菌液均勻涂布于平板表面。

2．平板劃線(xiàn)法 劃線(xiàn)的方式很多，其目的都是使平板上菌體逐漸變稀，最終形成單菌落。劃線(xiàn)用平板也要預先制備。常用的是以下兩種方式：

（1）針尖稍彎的接種針火焰滅菌并冷卻后，取樣；在靠近平皿邊緣處的平板上，將針尖的彎曲部位接觸平板，接種棒與平板面成30°～40°角，劃3條～4條平行線(xiàn)；轉動(dòng)平皿約50°角，灼燒接種針，冷卻后，通過(guò)前一區劃2條～3條平行線(xiàn)，并繼續劃2條～3條不通過(guò)前一區的平行線(xiàn)；再轉動(dòng)平皿……如此劃4區～5區（圖3—5A）。此種方法適用于分離純化固體培養基上的培養物。

（2）灼燒并冷卻的接種環(huán)取樣后，在平板上作連續劃線(xiàn)（圖3—5B）。此適用于液體樣品。

3．單細胞挑取法 把一滴菌懸液置于載玻片上，用安裝在顯微鏡挑取器上的極細的毛細吸管，在顯微鏡下對準某一個(gè)單獨的細胞吸取，再接種于培養基上培養。此法限于高度專(zhuān)業(yè)化的科研。

4．利用選擇培養基分離法

（1）采用選擇性高的培養基 例如，以纖維素為唯一碳源，分離分解纖維素的微生物；用無(wú)氮培養基分離自生固氮菌；在15ml培養基中加25％乳酸1滴～2滴以抑制細菌生長(cháng)，把受細菌污染的霉菌分離出來(lái)。

（2）培養基中加抑制劑 例如，結晶紫10mg/L可抑制G+細菌生長(cháng)，利于分離G-細菌；KMnO4100mg/L抑制細菌和霉菌生長(cháng)，利于分離放線(xiàn)菌；制霉菌素50mg/L或放線(xiàn)酮50mg/L利于分離純化放線(xiàn)菌；分離純化霉菌或放線(xiàn)菌時(shí)，加鏈霉素30mg/L、金霉素2mg/L可抑制細菌生長(cháng)。

5．其他 如，高溫處理（80℃ 15min或100℃ 10min）分離芽孢桿菌；4％KOH處理痰液，分離結核桿菌等等。

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