超廣譜β-內酰胺酶的測定

超廣譜β-內酰胺酶的測定 Detection of extended -spectrum β-lactamases (ESBLs)

超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs) 是指由質(zhì)粒介導的、能賦予細菌對頭孢菌素類(lèi)(如頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他啶)和單酰胺類(lèi)(氨曲南)以及青霉素類(lèi)抗生素耐藥的一類(lèi)酶。β-內酰胺酶不僅對某些抗生素的作用和地位帶來(lái)威脅，還對感染性疾病的治療和人類(lèi)健康產(chǎn)生嚴重的影響。 由于部分產(chǎn) ESBLs 菌株在常規體外藥敏試驗中，對含氧亞胺基的頭孢菌素和氨曲南等抗生素可能表現為敏感，而在感染患者體內卻耐藥，常造成臨床治療失敗。 目前用于超廣譜β-內酰胺酶篩選的試驗主要有初篩試驗和表型確證試驗(包括E 試驗法) ，另外還有產(chǎn)色素頭孢菌試驗等。 超廣譜β-內酰胺酶檢測主要用于大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和奇異變形桿菌。

（一） 初篩試驗和表型確證試驗

初篩試驗和表型確證試驗均有紙片法和稀釋法兩種，這里以紙片法為例來(lái)解釋初篩試驗和表型確證試驗的檢測。

1.初篩試驗 按常規紙片擴散法在 M-H 平板上涂布好待檢菌，貼頭孢曲松 30μg/片(或頭孢噻肟 3 0 μg/片，或頭孢他啶30μg/片，或氨曲南 30μg/片，或頭孢泊肟 10μg/片;使用一種以上的藥物可以增加檢出敏感度) ， 35℃孵育 18 ~20 h 。 結果判斷: 頭孢泊肟≦17 mm，頭孢他啶≦22 mm，氨曲南≦27 mm，頭孢噻肟≦27 mm，頭孢曲松≦25 mm，提示可能產(chǎn)生 ESBLs。

注：進(jìn)行 ESBLs 初篩試驗，肺炎克雷伯菌 ATCC700603 可以提供質(zhì)量評估(例如培養、能力或試驗效果) 。

肺炎克雷伯菌 ATCC700603 或大腸埃希菌 ATCC25922 可以用于常規的質(zhì)量控制(例如每周或每日) ，對于肺夾克雷伯菌 ATCC700603 ，頭孢泊肟抑菌圈 9 ~16 mm，頭孢他啶抑菌圈 10~ 18 mm，氨曲南抑菌圈 9 ~17mm，頭孢噻肟抑菌圈 17 ~25 mm，頭孢曲松抑菌圈 16~24 mm。

2 . 表型確證試驗 按標準紙片擴散法藥敏試驗，將菌液涂布到M- H 平板后，分別貼頭孢他啶(30μg)和頭孢他啶/克拉維酸(30μg/ 10μg) 紙片，或頭孢噻肟(30μg) 和頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/ 10μg) 紙片(確證實(shí)驗需要同時(shí)使用頭孢他啶和頭孢噻肟，單獨和聯(lián)合克拉維酸復合試劑) ，各紙片之間的間距≧24 mm。35℃ 孵育 18 ~20 h ，觀(guān)察結果。 2個(gè)藥物中有任何一個(gè)，在加入克拉維酸后，抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈相比，增大值≧ 5mm 時(shí)，即判定為產(chǎn) ESBLs( 如：頭孢他啶的抑菌圈為 16 mm，頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈為21 mm) 。

注：進(jìn)行 ESBL 確診試驗時(shí)，需要測試肺炎克雷伯菌 ATCC700603 和大腸埃希菌 ATCC25922( 每周或每日) 。 對于大腸埃希菌 ATCC25922 ，所測試的藥物聯(lián)合克拉維酸的復合制劑后的抑菌圈與單藥的抑菌圖相比，增大值當在≦2mm。 對于肺炎克雷伯菌 ATCC700603 ，頭孢他啶聯(lián)合克拉維酸的復合制劑的抑菌圈，與單獨的頭抱他咬的抑菌圈相比，增大值≧5 mm，頭孢噻肟聯(lián)合克拉維酸的復合制劑的抑菌圈，與單獨的頭孢噻肟的抑菌圈相比，增大值≧3 mm。

（二）E 試驗法篩選試驗

屬于表型確證試驗。 按紙片瓊脂擴散法制備菌液和接種平板，待菌液稍干，將 ESBL 試條貼于平板上，有刻度面朝上，35℃ 孵育 18~24 h 后，讀取試條兩端的 MI C 值，頭孢他啶與頭孢他啶十克拉維酸或頭孢噻肟與頭孢噻肟+克拉維酸的比值≧8. 判定 ESBLs 陽(yáng)性，否則陰性。

（三） 產(chǎn)色頭孢菌素試驗

原理：頭孢酶紙片是浸有色原底物的頭孢菌素，即頭孢硝噻吩的紙片，當β-內酰胺酶水解當β-內酰胺環(huán)中的氨基鍵時(shí)，此化合物發(fā)生快速的顏色變化，由黃變紅為陽(yáng)性。

方法：將待檢菌株涂在含產(chǎn)色頭孢菌素(nitrocefin.  NI)的試紙條上，如該菌株產(chǎn)當β-內酰胺酶，則在 10 min 之內，試紙上涂有細菌的部位顏色由黃變紅。 這是一個(gè)快速定性檢測當β-內酰胺酶的方法，陽(yáng)性結果說(shuō)明該菌產(chǎn)當β-內酰胺酶，但不一定是 ESBLs。

上一篇：真菌菌絲

下一篇：真菌學(xué)檢驗標本采集