抗菌藥物的敏感試驗——紙片瓊脂擴散法

紙片瓊脂擴散法：

1.基本原理將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后會(huì )不斷地向紙片周?chē)鷧^域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周?chē)�抑菌濃度范圍內待檢菌的生長(cháng)被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度(MIC)呈負相關(guān)，即抑菌圈愈大， MIC 愈小。

2 . 試驗方法

 (1)挑取培養18~24 h 純培養菌落4~5 個(gè)。

(2) 接種于3~5 ml 水解酷蛋白(Mueller-Hinton ， M-H 0.5 麥氏單位)肉湯中，經(jīng)35 ℃培養6~8 h

(3) 用無(wú)菌生理鹽水或M-H 肉湯校正菌液濁度，使其與標準比濁管的濃度相同(圖3 - 49c) 。在15 min 內接種完。

(4) 用無(wú)菌棉拭蘸取校正過(guò)的菌液，在試管壁上擠壓幾次，壓去多余的菌液，涂布整個(gè)M-H 平板表面，再重復兩次，每次旋轉平板60° ，使整個(gè)平板涂布均勻 ，最后用棉拭涂布平板四周邊緣。

(5) 涂布菌液的平板于室溫中干燥3~5 min 后，用紙片分配器或無(wú)菌懾子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用懾尖輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24 mm ，紙片的中心距平板的邊緣不小于15 mm;90 mm直徑的平板宜貼6 張藥敏紙片。貼完紙片后，應在15 min 內將平板反轉。

(6) 將貼好紙片的平板置35℃ 孵育18~24 h 后，用卡尺量取抑菌圈直徑。個(gè)別菌孵育溫度，時(shí)間及條件應按照CLSI(Clinical Laboratory Standard Institute) 規定。

3 . 結采判斷根據CLSI M100 最新標準將所測抑菌圈的大小，報告為敏感(S) 、中介/ 中敏(1)或耐藥(R) 。

4 . 對某些細菌抑菌圈的判讀有特殊要求

(1)檢測葡萄球菌或腸球菌對苯唑西林和萬(wàn)古霉素的抑菌圈需要用透射光(將平板對著(zhù)光線(xiàn)) 。肉眼看不見(jiàn)細菌生長(cháng)，需用放大鏡才能發(fā)現的細小菌落則可忽略不計。檢測葡萄球菌或腸球菌時(shí)，在苯唑西林紙片(葡萄球菌) 或萬(wàn)古霉素紙片(腸球菌) 周?chē)�的透明抑菌圈內有任何明顯的菌落或生長(cháng)薄膜( 包括針尖樣菌落) 則提示耐藥。

( 2) 如抑菌圈內有獨立生長(cháng)的菌落，則提示可能有雜菌， 需要重新分離鑒定和藥敏試驗。此菌落也可能為高頻突變耐藥株。

(3) 變形桿菌屬可蔓延到某些抗生素的抑菌圈內，所以在明顯的抑菌圈內有薄膜樣爬行生長(cháng)可忽略不計。

(4) 某些細菌的磺膠類(lèi)藥抑菌圈內可能有微量的細菌生長(cháng)，可忽略不計，應以外圈為準。

(5) 測試鏈球菌時(shí)應測量生長(cháng)受抑制區域而不是溶血受抑制區域。

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