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    培養基介紹



    錄入時(shí)間:2011-11-4 11:50:51 來(lái)源:青島海博

     

    培養基是發(fā)酵過(guò)程或動(dòng)植物細胞大量培養中供微生物或動(dòng)、植物細胞的生長(cháng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物,以合成生物化工產(chǎn)品所必需的營(yíng)養基質(zhì)。培養基的選擇應根據微生物生長(cháng)代謝活動(dòng)的需要,并有利于合成細胞物質(zhì)和生物化工產(chǎn)品的生成。培養基中主要含有水、碳源(能源)、氮源、礦物質(zhì),有的還需要提供維生素等。在酶反應過(guò)程中,原料液中被轉化的物質(zhì)亦即酶的作用物,亦可稱(chēng)為底物。

     

        培養基的選擇一般盡可能要滿(mǎn)足以下要求:①單位質(zhì)量基質(zhì),應能產(chǎn)生最大量的生物物質(zhì)或生物化工產(chǎn)品,并且要使所產(chǎn)生的生物物質(zhì)或生物化工產(chǎn)品在發(fā)酵液中的濃度最高,產(chǎn)率最高,使不需要的其他代謝產(chǎn)物的生成,限在最低范圍內。②培養基成本低、質(zhì)量均一并隨時(shí)保證提供使用。③培養基使用時(shí),對通氣、攪拌、后處理和三廢治理等方面所產(chǎn)生的問(wèn)題最少。

     

        分類(lèi)  按其組成成分分成三類(lèi):①天然培養基,全由天然產(chǎn)物組成,例如含淀粉、黃豆餅粉等天然物質(zhì);②復合培養基,由部分天然產(chǎn)物和部分已知成分的化合物組成,例如其中的氮源既有天然物質(zhì)黃豆餅粉,又有合成化合物硫酸銨;③合成培養基,全由已知成分的化合物所組成,例如以純的碳水化合物或碳氫化合物為碳源,以銨鹽為氮源。天然培養基和復合培養基常用于工業(yè)生產(chǎn),而合成培養基(偶爾包括復合培養基)則常用于試驗。

     

        按用途分類(lèi)包括:①基礎培養基,營(yíng)養需求相似的一些生物其所需的營(yíng)養物大體相同,因之可配制一種適合于它們共同需要的含有基本營(yíng)養成分的基礎培養基;②增殖培養基,又稱(chēng)豐富培養基,常用于菌種選育方面。它是由基礎培養基,再加入特殊的營(yíng)養物質(zhì),以使某種差異型微生物在其中迅速生長(cháng)繁殖;③鑒別培養基,即在培養基中加入某種試劑,從而在培養過(guò)程中表現出特殊反應,用以鑒別不同類(lèi)型的微生物,如無(wú)菌試驗用的酚紅肉湯培養基,就是一種鑒別培養基;④選擇培養基,根據某些微生物具有特殊營(yíng)養要求,或對某些化學(xué)物質(zhì)具有抗性而設計的,例如在配方中加入某種化學(xué)藥物,以限制對敏感菌的生長(cháng)繁殖,而將對其不敏感的所需的微生物分離出來(lái)。如在分離酵母菌時(shí),可加入青霉素、鏈霉素等以抑制細菌的生長(cháng)。

     

        培養基還可根據其形態(tài)分成液體或固體培養基。例如用于無(wú)菌試驗的肉湯培養基為液體培養基。用于培養青霉菌孢子的小米或大米為固體培養基,在培養基中加入適量瓊脂而形成的凝膠培養基,也稱(chēng)固體培養基。

     

        成分  培養基的成分包括:碳源、氮源、礦物質(zhì),以及其他必需物質(zhì)。這些成分通過(guò)生物反應過(guò)程,生成生物物質(zhì)、生物化工產(chǎn)品,并放出CO2、H2O和熱量。

     

        培養基的成分還可以由發(fā)酵過(guò)程中所需的元素出發(fā),如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要時(shí)還有一些需要量很少的微量元素,Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在發(fā)酵過(guò)程中某些生物本身不能合成的物質(zhì),如氨基酸、維生素或核苷酸等,必要時(shí)亦作為營(yíng)養物質(zhì)加入到培養基中。

     

        碳源  具有雙重作用。生物在產(chǎn)生生物物質(zhì)或生物化工產(chǎn)品過(guò)程中,它不僅為其提供碳源,也為其提供能源。碳水化合物是微生物發(fā)酵中的主要碳源,包括淀粉、葡萄糖、蔗糖和乳糖等。此外,植物油如豆油、棉籽油、玉米油等亦常被應用作為碳源。這類(lèi)油常與表面活性劑合用,以消除發(fā)酵過(guò)程中所產(chǎn)生的泡沫。甲醇可用以生產(chǎn)單細胞蛋白。正烷烴類(lèi)可用以生產(chǎn)有機酸、氨基酸和維生素等,甚至二氧化碳也可作為光合細菌的碳源。

     

        氮源  包括無(wú)機氮源和有機氮源。無(wú)機氮源包括氨、銨鹽及硝酸鹽等,它們在被應用時(shí)應注意發(fā)酵中pH的變化;有機氮源包括氨基酸、蛋白質(zhì)及尿素等,有機氮源的加入往往加快了生物的生長(cháng)。因考慮到成本因素,一些有機氮源,如黃豆餅粉、花生餅粉、棉籽餅粉、玉米漿、魚(yú)粉、酵母粉等常被選用。

     

        培養基的組成中除了水分外,碳源和氮源的含量是最大的。碳源含量一般不超過(guò)10%,氮源含量較低,一般碳氮比應為34:1。碳、氮源含量不能過(guò)高的原因是避免產(chǎn)生基質(zhì)或產(chǎn)物對反應的抑制和因滲透壓過(guò)高引起細胞失水而死亡。

     

        礦物質(zhì)  培養基中 Mg、P、K、S、Ca、Cl常是主要的礦物質(zhì)的組成成分,其他如Co、Cu、Fe、Mn、MoZn也往往不可少,但需要量很小,可從其他主要培養基成分中得到。如是使用合成培養基就需要把這些微量元素加進(jìn)去。它們不僅為生物生長(cháng)所必需,也是為了得到某些產(chǎn)物所必不可少者。例如生物合成青霉素或頭孢菌素需要一定量的硫;生物合成維生素B1需要一定量的鈷。

     

        維生素  某些生物在培養過(guò)程中需要某些維生素,往往在天然培養基中已經(jīng)提供了必要的維生素,但在某些特殊情況下需單獨加入維生素。例如在谷氨酸生產(chǎn)過(guò)程中需加入生物素,某些植物細胞培養中需要硫胺素(維生素B1)。

     

        緩沖劑  由于發(fā)酵過(guò)程中pH對形成生物產(chǎn)物的影響很大,為維持穩定的pH,常采用緩沖劑,例如碳酸鈣或磷酸鹽。后者除能調節pH外,還為培養基提供磷源。

     

        前體或代謝調節劑  前體是指某一種化合物被加入到發(fā)酵培養基中之后,能直接參與產(chǎn)物的生物合成中去。如在青霉素G(即芐基青霉素)的發(fā)酵過(guò)程中,加入適當的芐基化合物(如苯乙酸)能明顯提高青霉素 G的產(chǎn)量。

     

        代謝調節劑中包括抑制劑和誘導劑,當一種抑制劑加入到發(fā)酵過(guò)程中時(shí)能抑制不需要的產(chǎn)物,而大量產(chǎn)生所需的特定產(chǎn)物(或中間體)。如在四環(huán)素發(fā)酵中,加入溴化物能抑制金霉素(即氯四環(huán)素)的形成,從而增加四環(huán)素的產(chǎn)量。至于誘導劑,多數酶的生成需要它來(lái)誘導。在正常情況下,酶所需的基質(zhì)或基質(zhì)的類(lèi)似物,可用作誘導劑。如曲霉產(chǎn)生α-淀粉酶時(shí)需要淀粉作誘導劑。

     

        防沫劑  也稱(chēng)消泡劑,一種表面活性劑,能降低泡沫的表面張力,從而消除發(fā)酵中泡沫。在多數好氣發(fā)酵中需解決泡沫問(wèn)題。泡沫形成的主要原因是由于在培養基中有蛋白質(zhì),從而在發(fā)酵液和空氣泡之間的界面上形成膜,這種膜不易被破壞。泡沫大量形成后,能進(jìn)入發(fā)酵罐的排氣管道而造成發(fā)酵染菌及發(fā)酵液流失。常用的消泡劑為油脂類(lèi)、酯類(lèi)、硅油及聚氧乙烯-聚氧丙烯甘油醚。加入消泡劑能降低氧傳遞率達50%,因此消泡劑應盡量少加。

     

        在大規模連續發(fā)酵培養單細胞蛋白中,需將發(fā)酵液循環(huán)以充分利用其中的營(yíng)養物質(zhì)。但在循環(huán)過(guò)程中需調節其中營(yíng)養物的含量水平。采用此工藝時(shí),常注意防止在單細胞蛋白飼料中,過(guò)多積累不必要的其他代謝物。

     

        動(dòng)物細胞的培養基,包括葡萄糖(有時(shí)加半乳糖)、氨基酸(有時(shí)加蛋白水解液)、維生素、激素、無(wú)機鹽及血清等,其中血清常是必要的,且含量要占5%~10%。由于它的來(lái)源有限,價(jià)格高昂,因此正在進(jìn)行無(wú)血清培養的研究。植物細胞的培養基,除了包括微生物培養基的基本成分外,還必須包含植物激素(如生長(cháng)素、細胞分裂素等)、植物生長(cháng)調節劑(人工合成的外源激素)及必要的前體。

     

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