抗生菌的體外鑒別

1、了解抗生素產(chǎn)生菌體外篩選法的原理。

2、學(xué)習并掌握抗生菌的鑒別方法。

原理

由土壤中分出的放線(xiàn)菌需進(jìn)一步鑒別是否為需要的抗生菌。首先應根據篩選目的確定試驗模型，然后利用培養基平板進(jìn)行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。其主要依據是擴散原理，即觀(guān)察在抗生菌周?chē)�是否�?huì )出現明顯的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度則表明了該菌株抗菌活性的強弱。本實(shí)驗選用了這兩種方法。

儀器與材料

1、培養基：500ml三角瓶中分裝300ml黃豆餅粉瓊脂，18×180mm試管分裝

4ml黃豆餅粉浸汁，300ml三角瓶分裝150ml細菌培養基，150ml三角瓶分裝50ml馬鈴薯培養基。

2、試驗菌：

（1）枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）

（2）大腸桿菌（Escherichia coli）

（3）金黃色葡萄球菌（Staphlococcus aureus）

（4）深紅酵母（Ruodotorula rubra）

3、待測菌株：

（1）瓊脂培養物：將融化的黃豆餅粉瓊脂倒入無(wú)菌培養皿，制成平板。用記號筆在平皿背面畫(huà)一直線(xiàn)，將平皿一分為二，分別注明待測菌株的編號。并按照編號將待測菌株密集劃線(xiàn)接入平板。同法接入華美鏈霉菌（Streptomyces splendens）和金霉素鏈霉菌（Streptomyces aureofaciens）作為對照菌，28℃下培養7天。

（2）發(fā)酵液：將待測菌株和對照菌分別接入黃豆餅粉培養液，作好標記，28℃下振蕩培養7天。

4、滅菌物品：培養皿，打孔器，鑷子，圓濾紙片，15×150mm試管分裝5ml無(wú)菌水，1ml吸管，無(wú)菌漏斗。

5、其它：接種用具，游標卡尺，記號筆，搖床。

方法

一、瓊脂塊法

1、分別取枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌各1支，加入5ml無(wú)菌水制成菌懸液，備用。

2、取9套無(wú)菌培養皿，向每套培養皿中分別加入1ml試驗菌懸液，然后加入約12ml冷卻至45℃左右的細菌培養基，迅速在實(shí)驗臺上搖勻，制成指示菌平板。每1種指示菌3個(gè)重復， 并注明指示菌及測定菌株的位置。

3、用無(wú)菌打孔器將待測菌株和對照菌的黃豆餅粉瓊脂培養物切塊，每種培養物9塊。

4、用無(wú)菌接種針，將待測菌株和對照菌瓊脂塊分別移入各指示菌平板的相應位置上，菌面朝上，間隔均勻擺放。

5、靜置20min后，放入恒溫箱，37℃下培養18～24h。

6、用游標卡尺測量抑菌圈直徑，并觀(guān)察抑菌圈的透明程度和邊緣整齊程度。

二、濾紙片法

1、向深紅酵母菌斜面中加入5ml無(wú)菌水，制成菌懸液。

2、向已冷卻至45℃左右的馬鈴薯培養基中加入0.5ml深紅酵母菌懸液，搖勻后，倒3個(gè)指示菌平板，并在平皿背面標明測定菌株的位置，備用。

3、過(guò)濾各測定菌株的發(fā)酵液。

4、用無(wú)菌鑷子取無(wú)菌的圓濾紙片，蘸取各測定菌株的發(fā)酵濾液，放入指示菌平板的相應位置上，每1測定菌株3個(gè)重復。

5、靜置20min后，28℃下培養2天。

6、用游標卡尺測量抑菌圈直徑，并觀(guān)察抑菌圈的透明程度和邊緣整齊程度。

結果

將實(shí)驗所得結果填入下表，抑菌圈直徑以mm來(lái)表示

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