病原性球菌形態(tài)與培養物觀(guān)察及致病性葡萄球菌的鑒定

病原性球菌主要指葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌及淋球菌。

這些細菌經(jīng)常引起人類(lèi)的化膿性疾病，故又稱(chēng)化膿性球菌。

在臨床進(jìn)行微生物學(xué)檢查時(shí)，根據這些細菌各不相同的形態(tài)、染色、培養等特點(diǎn)，即可做出初步診斷。

當難以確定它們的致病性或耐藥性時(shí)，則需作進(jìn)一步的實(shí)驗來(lái)鑒定。

一、病原性球菌的形態(tài)觀(guān)察

【材料】葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎球菌、淋球菌的革蘭染色片及肺炎鏈球菌的莢膜染色片。

【方法】

鏡檢上述各示教片，注意各菌的形態(tài)、排列、染色性以及肺炎球菌的莢膜。

二、病原性球菌的培養物觀(guān)察

【材料】金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌，甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血瓊脂平板及腦膜炎球菌在巧克力色血瓊脂平板上的24小時(shí)培養物。

【方法】

1、觀(guān)察金黃色、表皮和腐生葡萄球菌在血平板上的生長(cháng)情況，注意菌落的色素及溶血性。

2、觀(guān)察甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血平板上的生長(cháng)情況，注意菌落大小、表面、透明度及溶血性。比較甲鏈和肺炎鏈球菌的菌落有無(wú)區別。

3、觀(guān)察腦膜炎球菌在巧克力色血平板上的生長(cháng)情況，注意菌落表面、透明度。

三、致病性葡萄球菌的鑒定

絕大多數致病性葡萄球菌具有如下特點(diǎn):

1、產(chǎn)生金黃色色素。

2、對家兔或綿羊紅細胞有溶血作用。

3、厭氧條件下分解甘露醇產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

4、血漿凝固酶試驗陽(yáng)性。

（一）血漿凝固酶試驗（試管法）

血漿凝固酶是致病性葡萄球菌產(chǎn)生的，可使含有肝素或枸椽酸鈉抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類(lèi)物質(zhì)，是判斷葡萄球菌致病性的最重要指標。游離凝固酶用試管法檢測，結合凝固酶用玻片法測試。

【材料】金黃色及檸檬色葡萄球菌24小時(shí)肉湯培養物、無(wú)菌肉湯、兔血漿（1:2）、生理鹽水、試管、吸管等。

【方法】

1、于三支小試管中各加1:2兔血漿0.5ml。

2、三管分別加金黃色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌和無(wú)菌肉湯各0.5ml。

3、將試管置37℃溫箱，每半小時(shí)觀(guān)察一次（觀(guān)察時(shí)將試管稍微傾斜）。于3小時(shí)內出現凝固者為陽(yáng)性，一般均于1小時(shí)左右凝固。

【結果】

凡血漿呈現膠凍狀為陽(yáng)性，仍呈液狀為陰性。

（二）血漿凝固酶試驗（玻片法）

【材料】葡萄球菌24小時(shí)培養物、兔血漿、生理鹽水、玻片等。

【方法】

1、取清潔玻片一張用蠟筆劃分成二格，各加生理鹽水2接種環(huán)。

2、用接種環(huán)分別取葡萄球菌菌落少許在鹽水中磨勻，使成濃厚而均勻的細菌懸液。

3、于其中一格加兔血漿1接種環(huán)，另一格加生理鹽水1接種環(huán)。

4、1-2分鐘后觀(guān)察結果，如血漿凝固呈顆粒狀，而鹽水側仍呈均勻混濁者，表示結果陽(yáng)性，如二格都無(wú)凝固現象出現者為陰性。

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