植物病毒血清學(xué)檢測—膠乳凝聚反應

     病毒的抗體吸附在一種與免疫無(wú)關(guān)的大顆粒表面，然后與相應的抗原結合，出現明顯可見(jiàn)的凝聚反應，顆�？捎胁煌�種類(lèi)，這里介紹致敏膠乳毛細管凝聚反應。

   1.實(shí)驗材料和用具

    (1)特異性抗體致敏膠乳
    (2)系統感染病毒的植株和健康植株
    (3)0.1M Tris(緩血酸胺)+0.85 ％NaCl緩沖液，pH7.4
    (4)毛細管、研缽、微量離心管、玻片、膠布、臺式離心機

  2.實(shí)驗步驟

    (1)取顯癥葉片，用緩沖液配成1 ∶10和1 ∶20 的懸浮液，5000轉離心5分鐘備用，同樣方法制備健康對照植物的汁液。
    (2)致敏膠乳用前搖勻，用毛吸管吸取致敏膠乳，約長(cháng)1cm。
    (3)用已吸取膠乳的毛吸管再吸取病毒懸浮液約長(cháng)2cm，使抗原與膠乳用量為2 ：1，注意兩液之間不能有氣泡，同樣方法做對照。
    (4)將毛細管按設計順序排列在玻片上，用膠布條固定，做好標記，并用濾紙吸去管外多余液體。
    (5)在室溫下孵育 15-30 分鐘，此期間來(lái)回顛倒數次，使膠乳和病毒懸浮液充分混合。
    (6)解剖鏡或低倍顯微鏡下觀(guān)察并記載凝聚物生成情況。

    記錄按五級記載：0 －無(wú)凝聚物；1－不易辨別的類(lèi)似凝聚物；2 －凝聚物小而少；3－凝聚物多；4－凝聚物多而大。2 以上為陽(yáng)性反應。

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