病毒鑒定—微量免疫電泳

    把電泳技術(shù)與免疫雙擴散技術(shù)結合起來(lái)的方法稱(chēng)為免疫電泳，有不同類(lèi)型，本試驗介紹微量免疫電泳，用于病毒鑒定。

   1.實(shí)驗材料和用具

    (1)抗血清
    (2)提純病毒
    (3)0.025M磷酸鹽緩沖液(PB)、pH7.0，10％NaN3，1.5％SDS，瓊脂糖(電泳用)。

    (4)載玻片、打孔器、開(kāi)槽刀片、針頭、微量加樣器、飯盒、電泳儀和水平電泳槽、25℃溫箱。

  2.實(shí)驗步驟

    (1)洗凈載玻片，泡在乙醇中，使用前取出擦干備用。
    (2)用緩沖液配制1％瓊脂糖液，煮化后加入0.02％NaN3，80℃水浴中備用。

    (3)在微量離心管中將等量的1.5％SDS和提純病毒混勻，開(kāi)水浴中煮2-4分鐘備用。
    (4)用吸管吸取2ml瓊脂糖液，加在載玻片上，注意保持液面水平，分布均勻，厚度為2mm，室溫下放置10分鐘，移入飯盒保濕，繼續放置30分鐘使其充分凝固。
    (5)在凝膠上打孔和開(kāi)槽，并做正負極記號。
    (6)去掉孔內凝膠，在孔中加入SDS處理過(guò)的病毒懸浮液，注意不要溢出。
    (7)將玻片放入水平電泳槽，以0.025M   PB   pH7.0為電泳緩沖液，電流量為3-5mA/片，電泳40分鐘。
    (8)電泳后取出玻片用針將槽內凝膠去掉。
    (9)在槽內加入血清，飯盒內保濕，25℃下孵育20-40小時(shí)觀(guān)察沉淀線(xiàn)的形成。

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