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免疫雙向擴散反應是在半固態(tài)基質(zhì)(瓊脂膠)中的沉淀反應，具有簡(jiǎn)便和直接應用血清的優(yōu)點(diǎn)，并可由沉淀線(xiàn)的形成特點(diǎn)分析病毒間的關(guān)系。但受病毒粒子形態(tài)的影響，使用有局限性，更適用于球形病毒，同時(shí)也有靈敏度不高的缺點(diǎn)。
1.實(shí)驗材料和用具
(1)抗血清
(2)系統感染病毒的植株和健康植株。
(3)生理鹽水、0.025M磷酸緩沖液(PB)，pH7.2 ，3 ％SDS(十二烷基硫酸鈉)、10％NaN3(疊氮鈉)、精制瓊脂粉(或瓊脂糖粉)。
(4)塑料培養皿、打孔器、滴管、吸管、微量離心管、量筒、三角瓶、50℃熱水浴。
2.實(shí)驗步驟
(1)取1g瓊脂粉(依瓊脂質(zhì)量可在0.5-1.5g之間)加入100ml PB煮至瓊脂完全融化(對光看，無(wú)顆粒狀物)，加1ml 10％NaN3，加蒸餾水補足至100ml，放在熱水浴中待用。
(2)將融化的瓊脂倒入塑料或玻璃培養皿約2mm 厚(8.8cm直徑的培養皿中約放20ml) ，室溫下放置30分鐘使凝固。倒瓊脂液時(shí)注意保持液面水平，凝固前避免移動(dòng)。
(3)制備病毒樣品，如為球形病毒，1g葉組織加1ml緩沖液研磨；如為長(cháng)條病毒，1g葉組織加1ml緩沖液再加1ml 3％SDS研磨。將汁液放入微量離心管中3000轉離心2分鐘備用，根據需要，半提純樣品液也可作為樣品。
(4)用生理鹽水稀釋抗血清為三個(gè)濃度1 ∶2，1 ∶4，1 ∶16。
(5)用打孔器在凝固的瓊脂板上打孔，可有各種大小及排列形式，常用為2-5mm直徑和梅花狀排列,用鑷子,針頭或抽吸器去掉孔中凝膠。
(6)加樣時(shí)可因實(shí)驗的目的不同而有不同的組合方式，常用的為中心孔加抗血清,周?chē)准涌乖敖≈陮φ?加樣量以滿(mǎn)面而不溢出為度。
(7)25℃下保存孵育24-48小時(shí)，觀(guān)察沉淀線(xiàn)的形成，記錄結果。
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