結核病實(shí)驗室細菌學(xué)診斷研究

    1996年新研制出BactecTB960分枝桿菌全自動(dòng)快速培養儀功能與BactecTB460相似，但無(wú)放射性污染，在專(zhuān)用的7H9培養管中加入含有：RUTHENIUM熒光的底物，當檢測標本經(jīng)前處理接種于該培養管后，如有分枝桿菌存在，其代謝產(chǎn)物激發(fā)底物RUTHENIUM產(chǎn)生熒光，經(jīng)掃描自動(dòng)顯示以生長(cháng)指數(G1)表示的測定結果。但Bactec儀器價(jià)格昂貴，需專(zhuān)門(mén)進(jìn)口廠(chǎng)家的專(zhuān)利液體培養基，費用較高，而難以在普通實(shí)驗室廣泛開(kāi)展。 

    (2)分枝桿菌L型  是分枝桿菌在藥物等因素作用下產(chǎn)生的細胞壁缺陷型，常規涂片、培養通常陰性，是分枝桿菌病遷延不愈、難治、復治的重要原因。分枝桿菌L型在體內誘導、體外誘導均獲成功，如應用氨芐西林、環(huán)絲氨酸、異煙肼、利福平、乙胺丁醇或甘氨酸加溶菌酶等均已得到成功的誘導。在結核病標本中開(kāi)展L型檢查[如涂片、培養和聚合酶鏈反應(PCR)]，可顯著(zhù)提高診斷的陽(yáng)性率，指導臨床進(jìn)行有效化療。 

    (3)噬菌體生物擴增法  其原理是活的MT可保護菌體內的噬菌體免受噬菌體殺滅劑作用。先將MT與MT噬菌體共同孵育，使噬菌體侵人MT內，再用抗結核藥物處理MT，若MT耐藥，則細菌能存活，隨后加入殺噬菌體藥物，位于菌體內部的噬菌體不被殺死。培養后，若有耐藥MT存在時(shí)會(huì )出現噬菌斑。該方法與傳統藥敏試驗方法符合率高，只需3天時(shí)間即可直接檢測標本，無(wú)需特殊儀器，操作簡(jiǎn)單。 

    (4)噬菌體生物發(fā)光法  分枝桿菌噬菌體40或分枝桿菌噬菌體88是在分枝桿菌噬菌體TM4的非必需區插入含蟲(chóng)熒光素酶表達基因Fflux與卡介苗hsp60啟動(dòng)子的融合體。重組噬菌體進(jìn)入相應的分枝桿菌體內繁殖，同時(shí)在hsp60啟動(dòng)子的作用下，Fflux基因表達蟲(chóng)熒光素酶，通過(guò)與體外發(fā)光系統中的熒光素作用而發(fā)光，檢測發(fā)光的強度即可間接對噬菌體進(jìn)行定性分析和定量分析，從而檢測分枝桿菌活菌數。噬菌體生物發(fā)光法對分枝桿菌具有高度的特異性，發(fā)光值較高，而對非分枝桿菌的發(fā)光值與陰性對照比較差異無(wú)顯著(zhù)性；在含抗結核藥物的培養基中，噬菌體對耐藥株的發(fā)光值比對藥物敏感株的發(fā)光值高。應用該方法檢測分枝桿菌和進(jìn)行藥敏試驗僅需3天，但不能鑒別致病分枝桿菌與非致病分枝桿菌。 

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