沙門(mén)菌病診斷技術(shù)

根據流行病學(xué)、臨床癥狀，只能做出初步診斷，確診需采集發(fā)病動(dòng)物的血液、內臟器官、糞便或采取流產(chǎn)胎兒胃內容物、肝、脾組織，做沙門(mén)菌的分離和鑒定。病原學(xué)檢測，傳統方法、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法等。血清學(xué)檢測：對血清中抗體的檢測(瓊擴、ELISA、免疫熒光等)。

    1．細菌的分離及鑒定

    用于沙門(mén)菌分析的傳統方法總體可分四個(gè)不同階段或步驟。第一步是增菌，將樣品加到一種高營(yíng)養、無(wú)選擇性的培養基中，溫度37~C，使沙門(mén)菌復蘇及使所有微生物生長(cháng)。第二步是選擇性增菌步驟，它使沙門(mén)菌生長(cháng)而使肉湯中同時(shí)存在的微生物數量減少，目前應用的主要有如下3種類(lèi)型的培養基：連四硫基鹽肉湯、硒酸鹽胱氨酸肉湯和RV(rappaport-vassiliadis)培養基。由于沒(méi)有任何一種培養基可以全面地保持所有食品基質(zhì)或各種沙門(mén)菌血清型，所以，較適當的做法就是使用兩種培養基平行地進(jìn)行試驗。第三步是細菌分離，即選擇性培養物在含一種或多種抑制非沙門(mén)菌生長(cháng)制劑的瓊脂乎板上劃線(xiàn)培養，然后對平板上肉眼可見(jiàn)的特征性菌落進(jìn)行確認，并對該菌落分離物進(jìn)行一系列生化和血清學(xué)檢測。第四步是生化鑒定和血清分型，得出結論。傳統沙門(mén)菌檢測法全過(guò)程需時(shí)至少4—7天，才能得出明確的診斷結果。在對檢測菌株進(jìn)行血清學(xué)鑒定時(shí)，應注意沙門(mén)菌抗原并非沙門(mén)菌所特有，已知弗氏檸檬酸桿菌和大腸埃希菌的許多抗原與沙門(mén)菌的抗原完全或部分相同。

    2．嗜菌體裂解分屬診斷法

    該方法是利用噬菌體對于細菌的裂解作用具有型的特異性或種和屬的特異性這一原理進(jìn)行的。該方法主要分為四個(gè)步驟，先將樣本按常規方法進(jìn)行前增菌后，劃線(xiàn)接種于鑒別平板，于37~C培養過(guò)夜。挑取可疑菌落于2ml胨水管內，使每毫升含細菌約50萬(wàn)一100萬(wàn)個(gè)。將備好的營(yíng)養瓊脂平板在37~C烘干表面水分，待平板上菌液干后，用微量加樣器依次加人噬菌體，然后再將平板培養6h以上，觀(guān)察結果。根據不同噬菌體對其的裂解率，判定檢測結果。對1181株沙門(mén)菌和323株其他菌株進(jìn)行沙門(mén)菌噬菌體O-I裂解試驗，結果表明沙門(mén)菌裂解率為99．5％，而非沙門(mén)菌裂解率為0．3l％。何曉青等發(fā)現一種腸桿菌科分屬診斷噬菌體，鑒定沙門(mén)菌只要6min，加上培養菌落時(shí)間只需2天。張碧波等在應用噬菌體快速檢測沙門(mén)菌時(shí)，對100個(gè)腸桿菌菌株進(jìn)行噬菌體O-I裂解試驗，30株沙門(mén)菌全部為陽(yáng)性，而其余非沙門(mén)菌全部為陰性，與前人的研究結果一致。因此，應用沙門(mén)菌噬菌體O—I裂解試驗對沙門(mén)菌的檢測是可靠的。

    3．基于代謝產(chǎn)物酶活性的檢測方法

    沙門(mén)菌在其生長(cháng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放某些特異性的酶，按酶的特性，選用相應的底物和指示劑，將它們配制在相關(guān)的培養基中。這種技術(shù)將傳統的細菌分離與生化反應有機地結合起來(lái)，并使得檢測結果直觀(guān)，成為今后微生物檢測發(fā)展的一個(gè)重要發(fā)展方向。

    據Manafi等報道，沙門(mén)菌屬(包括各亞屬)均產(chǎn)生辛酯酶，這一性能是腸桿菌科除沙雷菌屬外其他各屬細菌所不具備的，因此可用來(lái)鑒別沙門(mén)菌與腸桿菌科其他屬細菌。近來(lái)，意大利Biolife公司的試劑“MUCAP Test’可用于檢測腸桿菌科細菌、假單胞菌屬、氣單胞菌屬和類(lèi)志賀鄰單胞菌，該法對沙門(mén)菌有很高的敏感性和特異性，操作也十分簡(jiǎn)便、快速。中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標準SN 0332—94即為用4—甲基傘形酮辛酯(MUCAP)試劑對沙門(mén)菌進(jìn)行檢驗的方法。

上一篇：沙門(mén)菌病的臨床特征

下一篇：布氏桿菌病病原學(xué)