霉菌水浸標本片的制備與觀(guān)察

（一）實(shí)驗目的：學(xué)習自制水浸片觀(guān)察霉菌的形態(tài)

（二）實(shí)驗原理：霉菌的營(yíng)養體是分枝的絲狀體。其個(gè)體比細菌和放線(xiàn)菌大得多，分為基內菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。

霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片的特點(diǎn)是：細胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(cháng)時(shí)間，溶液本身呈藍色，有一定染色效果。

利用培養在玻璃紙上的霉菌作為觀(guān)察材料，可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)；也可以直接挑取生長(cháng)在平板中的霉菌菌體制水浸片觀(guān)察。

（三）實(shí)驗器材

1.活材料：在馬鈴薯瓊脂平板上或用玻璃紙透析培養法培養3—4天的根霉（Rhizpus sp.）、青霉（Penicillum sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）；

2.染色液和試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液（附錄二、（一）、10）、50%酒精（V/V）。

3.器材：剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡。

（四）實(shí)驗方法

1.制水浸制片觀(guān)察法  在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水，用解剖針從生長(cháng)有霉菌的平板中挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過(guò)的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開(kāi)來(lái)。蓋上蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再移動(dòng)蓋玻片），先用低倍鏡，必要時(shí)轉換高倍鏡鏡檢并記錄觀(guān)察結果。

2.玻璃紙透析培養觀(guān)察法

（1）玻璃紙的選擇與處理  要選擇能夠允許營(yíng)養物質(zhì)透過(guò)的玻璃紙。也可收集商品包裝用的玻璃紙，加水煮沸，然后用冷水沖洗。經(jīng)此處理后的玻璃紙若變硬，必定是不可用的，只有那些軟的可用。將那些可用的玻璃紙剪成適當大小，用水浸濕后，夾于舊報紙中，然后一起放入平皿內121℃滅菌30min備用。

（2）菌種的培養  按無(wú)菌操作法，倒平板，冷凝后用滅菌的鑷子夾取無(wú)菌玻璃紙貼附于平板上，再用接種環(huán)沾取少許霉菌孢子，在玻璃紙上方輕輕抖落于紙上。然后將平板置28—30℃下培養3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃紙上長(cháng)出單個(gè)菌落（根霉菌的氣生性強，形成的菌落鋪滿(mǎn)整個(gè)平板）。

（3）制片與觀(guān)察  剪取玻璃紙透析法培養3—4天后長(cháng)有菌絲和孢子的玻璃紙一小塊，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脫落下來(lái)的孢子，并趕走菌體上的氣泡，然后正面向上貼附于干凈載玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉藍液，小心地蓋上蓋玻片（注意不要產(chǎn)生氣泡），且不要移動(dòng)蓋玻片，以免搞亂菌絲。

標本片制好后，先用低倍鏡觀(guān)察，必要時(shí)再換高倍鏡。注意觀(guān)察菌絲有無(wú)隔膜，有無(wú)假根、足細胞等特殊形態(tài)的菌絲。注意其無(wú)性繁殖器官的形狀和構造，孢子著(zhù)生的方式和孢子的形態(tài)、大小等。

（五）實(shí)驗作業(yè)：

給出根霉、青霉、曲霉的個(gè)體形態(tài)圖，并注明各部位名稱(chēng)。

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