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一.實(shí)驗目的：掌握微生物變異的原理，學(xué)習用梯度平板法分離抗藥性突變株
二.實(shí)驗原理：基因突變可分為自發(fā)突變和誘發(fā)突變。許多物理、化學(xué)、生物因素對微生物都有誘變作用。
基因中堿基順序的改變可導致微生物細胞的遺傳變異。這種變異有時(shí)能使細胞在有害的環(huán)境中存活下來(lái)，抗藥性突變就是一個(gè)例子。微生物的抗藥性突變是DNA分子的某一特定位置的結構改變所致，與藥物的存在無(wú)關(guān)，某種藥物的存在只是作為分離某種抗藥性菌株的一種手段，而不是引發(fā)突變的誘導物。因而在含有一定抑制生長(cháng)藥物濃度的平板上涂布大量的細胞群體，極個(gè)別抗性突變的細胞會(huì )在平板上生成菌落。將這些菌落挑取純化，進(jìn)一步進(jìn)行抗性試驗，就可以得到所需要的抗藥性菌株�？顾幮酝蛔兂Ｓ米鬟z傳標記，因而掌握分離抗藥性突變株的方法是非常重要的。
為了便于選擇適當的藥物濃度，分離抗藥性突變株常用梯度平板法。本實(shí)驗用梯度平板法分離大腸桿菌抗鏈霉素突變株。
三. 實(shí)驗用品：參考實(shí)驗教材上的實(shí)驗用品。
四.實(shí)驗操作：
（1）取一個(gè)已經(jīng)滅菌的空平皿，把培養皿斜放(一邊墊起)，在無(wú)菌條件下倒入不含藥物的底層培養基（10mL LB培養基）；
（2）待平板中的培養基凝固后將平皿放平，再倒入含有鏈霉素的上層培養基（10mL LB培養基，含有鏈霉素100μg/mL）；
備注：這樣便得到鏈霉素濃度從一邊到另一邊逐漸降低的梯度平板。
（3）取一支大腸桿菌液體培養物，用移液管移取0.2mL菌液到梯度平板上，進(jìn)行涂布。
（5）將平板倒置于37℃培養2天；觀(guān)察經(jīng)一次培養的梯度平板上大腸桿菌的生長(cháng)情況。
（6）選擇平板上1～2個(gè)生長(cháng)在梯度平板中部的單個(gè)菌落，用無(wú)菌接種環(huán)接觸單個(gè)菌落朝高藥物濃度的方向劃線(xiàn)。
（7）將平板倒置于37℃培養2天；觀(guān)察經(jīng)二次培養的梯度平板上大腸桿菌的生長(cháng)情況。
五.注意事項：
玻璃涂布棒在火焰上灼燒后要待其冷卻后再進(jìn)行涂布，以免燙死細胞；可以蘸上乙醇后在火焰上灼燒，以縮短冷卻的時(shí)間。
