海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
NASBA（nucleic acid sequence-based amplification）是一項持續等溫的核酸擴增技術(shù)，特別適合于以RNA為模版的擴增，與其它常用禽流感病毒檢測方法（病毒培養法、免疫學(xué)方法和PCR）相比，具有靈敏度高、特異性強、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。就NASBA的操作原理及其在禽流感病毒檢測中的成功應用進(jìn)行綜述。NASBA不僅成為禽流感病毒檢測的有力工具，而且對于其它惡性傳染病的監測、檢測同樣具有重要價(jià)值和意義。
常用方法：病毒培養法、免疫學(xué)方法和核酸檢測方法。
病毒培養法是廣泛應用的實(shí)驗室檢測方法之一，靈敏度高，但操作費時(shí)（7~10天），而且對實(shí)驗室條件的要求也較高。與之相比，免疫學(xué)方法相對快速簡(jiǎn)便，但靈敏度和特異性差。而且抗體檢測的結果僅僅說(shuō)明被檢測的禽類(lèi)或動(dòng)物曾經(jīng)感染過(guò)禽流感病毒，而不能準確反映當前是否感染或攜帶病毒，因此，在應用方面具有一定的局限性。特別是目前的家禽大多被注射疫苗免疫，則不能使用該方法進(jìn)行篩查。核酸檢測方法（如PCR）用于A(yíng)IV的檢測，靈敏度高且快速，能夠準確反映是否攜帶病毒，可結合其它檢測方法加以進(jìn)一步判定。與常規PCR相比，熒光實(shí)時(shí)PCR（realtime PCR）技術(shù)檢測禽流感病毒，其靈敏度有很大提高，但是對于某些超低病毒載量的樣品，仍不能達到檢測要求。
NASBA：NASBA技術(shù)檢測禽流感病毒NASBA（nucleic acid sequencebased amplification）是一項以核酸為模板的快速等溫擴增技術(shù)。這項技術(shù)特別適用于RNA分子的檢測。自2002年首次在國際性刊物上發(fā)表了關(guān)于應用NASBA技術(shù)檢測禽流感病毒的論文以來(lái)，迄今已成功開(kāi)發(fā)出針對A型禽流感病毒所有亞型（H1-H15）（NASBA-AIV）和特異性針對H5亞型（NASBA-H5）、H7亞型（NASBA-H7）的禽流感病毒的NASBA/ECL檢測試劑盒。已正式發(fā)表的實(shí)驗數據顯示，NASBA技術(shù)比目前商品化的免疫檢測試劑盒敏感10~1000倍，比常規PCR方法也敏感許多，與現行的病毒培養的檢測方法靈敏度相當。但是，病毒培養通常需要一周以上的時(shí)間才能得到結果，而NASBA技術(shù)常規僅需要4~6小時(shí)就可以準確地得到結果，便于盡早采取防治措施，不僅如此，該技術(shù)操作簡(jiǎn)便，自動(dòng)化水平高，可以減少人為造成的誤差，而且還是一種高通量的方法，可以同時(shí)檢測50個(gè)樣本，非常適用于大規模樣品的篩查。
技術(shù)原理：NASBA技術(shù)使用3種酶（逆轉錄酶、RNA酶H和T7 RNA聚合酶）以及2條特別設計的寡核苷酸引物：在RNA模板（sense RNA）提取后，經(jīng)過(guò)引物（oligo P1和primer P2）和2次連續逆轉錄酶反應，在同溫度條件下進(jìn)入線(xiàn)性擴增循環(huán)，產(chǎn)物直接為單鏈反義RNA（anti-sense RNA）。NASBA技術(shù)與逆轉錄（RT）-PCR檢測RNA不同。RT-PCR在檢測RNA時(shí)，必先利用逆轉錄酶形成cDNA，然后利用溫度階梯進(jìn)行循環(huán)擴增，產(chǎn)物為cDNA，引物次序包含于終產(chǎn)物中。而NASBA技術(shù)可直接擴增RNA，是連續等溫度擴增，產(chǎn)物為單鏈RNA，引物次序不包含于終產(chǎn)物中。
上一篇：禽流感病毒檢測方法
下一篇：人皰疹病毒6型
