最近在培養細胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻也沒(méi)有得到確切的答案.因此不敢再用原來(lái)的血清,導致浪費.在這提醒大家做細胞培養時(shí),要注意血清的分裝.
血清是細胞培養中最重要的元素之一。在實(shí)驗室操作中要注意的事項及處理方法如下：
1. 血清保存: 建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì )存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養ES細胞，昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái)，不但節省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀?
胎牛血清沒(méi)有預老化，儲存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì )變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì )造成沉淀物的增多。
上一篇：細胞培養無(wú)菌操作注意事項
下一篇：突變生物合成在微生物藥物領(lǐng)域的研究進(jìn)展（1）
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
