海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
關(guān)鍵詞：顯色培養基；沙門(mén)氏菌；快速檢測
沙門(mén)氏菌是腸桿菌科中一重要致病菌屬，也是引起細菌性食物中毒的主要病原菌之一。隨著(zhù)食品生產(chǎn)和國際貿易的迅速發(fā)展，沙門(mén)菌檢測作為食品安全與質(zhì)量檢測的重要指標，目前國內采用的國標法(GB4789．4—2003)只適用于沙門(mén)菌的選擇性分離培養，不能特異性檢出沙門(mén)菌。用顯色培養基檢測細菌是一種新的快速方法，通過(guò)在培養基中加入細菌特異性酶的顯色底物，直接觀(guān)察菌落顏色就可對菌種作出鑒定。本文通過(guò)對培養基的靈敏度、特異性以及實(shí)際樣品檢測，比較了CHROMagar沙門(mén)菌顯色培養基簡(jiǎn)稱(chēng)(CHROMagar)、HK沙門(mén)菌顯色培養基(簡(jiǎn)稱(chēng)HK)與傳統平板DHL的檢測效果。
1 材料與方法
1.1 標準菌株來(lái)源 大腸桿菌ATCC25922、費氏檸檬酸桿菌ATCC8090、鼠傷寒沙門(mén)菌CMCC(B)50115、金黃色葡萄球菌ATCC6538、腸炎沙門(mén)菌CMCC(B)50335、湯卜遜沙門(mén)菌CMCC (B)50023、傷寒沙門(mén)菌CMCC (B)50071、奇異變形桿菌CMCC(B) 49005、嗜水氣單胞菌GIM1.172、銅綠假單胞菌ATCC9027，均由廣東省微生物研究所提供。
1.2 培養基及試劑CHROMagar沙門(mén)菌顯色培養基由法國科瑪嘉公司提供；HK沙門(mén)菌顯色培養基基礎和選擇性添加劑由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供；DHL干粉培養基由北京陸橋技術(shù)有限責任公司提供；GNI +試劑條由法國梅里埃公司提供。
1.3 主要儀器法國生物梅里埃公司Biomerieux全自動(dòng)微生物鑒定系統(VITEK32)。
1.4 樣品從廣東省污染物監測網(wǎng)檢測結果中挑取微生物污染嚴重的樣品，其中熟食20份，蔬菜、牛奶各10份。
1.5 方法
CHROMagar沙門(mén)菌顯色培養基、HKM沙門(mén)菌顯色培養基、DHL干粉培養基均按說(shuō)明書(shū)制備。
將大腸桿菌、費氏檸檬酸桿菌、鼠傷寒沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、腸炎沙門(mén)菌、湯卜遜沙門(mén)菌、傷寒沙門(mén)菌、奇異變形桿菌、嗜水氣單胞菌、銅綠假單胞菌沙門(mén)菌參考菌株畫(huà)線(xiàn)接種在營(yíng)養瓊脂培養基上37℃培養24h后，挑取單菌落加到10ml 0.85％生理鹽水中配成原液(n ×108scfu／m1)，然后進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)?/SPAN>10-5 、10-6 、10-7 菌液各100ul，分別涂布CHROMagar培養基、HK培養基平板，37℃培養24h，觀(guān)察菌落特征、量取菌落直徑和計算沙門(mén)菌平板的菌落數。
1.6 分離鑒定 將疑似菌落分離純化，用法國梅里埃公司GNI+ 試劑條進(jìn)行生化鑒定。
2 結果
2.1 顯色培養基的特異性 CHROMagar培養基、HK培養基均有較好的顯色效果。CHROMagar培養基上的沙門(mén)菌菌落為紫色，HK培養基上沙門(mén)菌菌落呈現品紅色(見(jiàn)表1)；金黃色葡萄球菌在兩種培養基上均不生長(cháng)；嗜水氣單胞菌和銅綠假單胞菌在HK培養基上不生長(cháng)，在CHROMagar培養基上生長(cháng)且顏色與沙門(mén)菌相似(分別為紫色和淺紫紅色)；變形桿菌在CHROMagar培養基上不生長(cháng)而在HKM培養基上的菌落為白色，可與沙門(mén)菌相區分；費氏檸檬酸桿菌和大腸桿菌在兩種培養基上均為藍綠色。
表1 不同沙門(mén)菌種的菌株在顯色培養基上的生長(cháng)情況
|
測試菌株名稱(chēng) |
CHROMagar沙門(mén)氏菌顯色培養基 |
HKM沙門(mén)氏菌顯色培養基 | ||||
|
菌落顏色 |
菌落直徑（mm） |
菌落數（cfu/皿） |
菌落顏色 |
菌落直徑（mm） |
菌落數（cfu/皿） | |
|
鼠傷寒沙門(mén)菌 |
藍紫色 |
1.7 |
6.4*108 |
品紅 |
2.15 |
7.9*108 |
|
腸炎沙門(mén)菌 |
淺紫色 |
1.77 |
7.4*108 |
品紅 |
2.93 |
1.1*109 |
|
湯卜遜沙門(mén)菌 |
藍紫色 |
1.56 |
1.1*109 |
品紅 |
3.07 |
1.4*109 |
|
傷寒沙門(mén)菌 |
淺紫紅色 |
1.97 |
7.3*108 |
品紅 |
0.95 |
6.8*108 |
2.2 顯色培養基的靈敏度 由表1可見(jiàn)，涂布相同濃度和劑量的4種沙門(mén)菌在兩種顯色培養基平板上，37℃培養24h后，菌落總數和菌落直徑結果均有差異。腸炎沙門(mén)菌在HK平板上的菌落數比在CHROMagar平板上約多5倍，湯卜遜沙門(mén)菌和傷寒沙門(mén)菌的結果較相近。傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar 培養基上菌落直徑(1.97mm)遠大于HK培養基(0.95mm)，其他3種沙門(mén)菌在HK培養基上的菌落大于CHROMagar培養基上的。
2.3 實(shí)際樣品檢測 40份實(shí)際樣品檢測出的陽(yáng)性菌株經(jīng)VITEK32的GNI+ 鑒定，結果詳見(jiàn)表2。
表2 三種培養基檢測40份樣品中沙門(mén)菌結果比較
|
樣品名稱(chēng) |
份數 |
DHL培養基 檢出數（%） |
CHROMagar檢出數（%） |
HK培養基檢出數（%） |
|
熟食 |
20 |
16（80.0） |
13（65.0） |
17（85.0） |
|
牛奶 |
10 |
9（90.0） |
9（90.0） |
9（90.0） |
|
生雞肉 |
10 |
9（90.0） |
9（90.0） |
9（90.0） |
|
總計 |
40 |
34（85.0） |
31（77.5） |
35（87.5） |
3 討論
沙門(mén)菌廣泛存在于自然界中，主要是通過(guò)食品(特別是動(dòng)物性食品)傳播、感染人體。國標法是目前國內絕大多數檢測機構都在使用的方法，由于其檢測周期長(cháng)、程序復雜、所需試劑繁多等缺點(diǎn)，已遠遠不能滿(mǎn)足現代檢測要求。顯色培養基法的原理是使用適當的熒光或顯色底物，在細菌特異性酶作用下，產(chǎn)生熒光或顯示一定顏色，用紫外燈觀(guān)察細菌產(chǎn)生的熒光或直接觀(guān)察菌落顏色，減少對菌株進(jìn)行純培養和生化鑒定步驟，可以把檢測、計數和鑒定一次完成，縮短檢測周期。
HKM和CHROMagar 培養基上的沙門(mén)菌呈現品紅或紫色的菌落與各自特異的酶底物和顯色劑有關(guān)。兩種培養基均能抑制金黃色葡萄球菌的生長(cháng)，大腸桿菌、費氏檸檬酸桿菌、奇異變形桿菌等雜菌或被抑制或菌落顏色與沙門(mén)菌有明顯差別。在CHROMagar培養基上，嗜水氣單胞菌和銅綠假單胞菌與沙門(mén)菌菌落顏色無(wú)法區別，而HK顯色培養基對這兩種菌有良好的抑制作用。從4種沙門(mén)菌的涂布培養結果可見(jiàn)，傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar培養基上的菌落較大，而HK培養基對某些沙門(mén)菌檢測的靈敏度比CHROMagar培養基多數倍，菌落直徑也明顯較大。
在實(shí)際樣品檢測中，3種培養基對牛奶、生雞肉中沙門(mén)菌的檢出率相同，而對熟食樣品檢出率差異較大，原因可能是熟食在生產(chǎn)加工的過(guò)程中添加的有機和無(wú)機成分種類(lèi)多且復雜，影響了酶與底物的反應，同時(shí)熟食較牛奶和生雞肉雜菌污染量大，使檢測結果出現一定比例假陽(yáng)性或假陰性，從而干擾目標菌的檢測，降低顯色培養基的敏感性和特異性。
綜上所述，顯色培養基在微生物檢測中的應用，可大大提高測效率，滿(mǎn)足應急需要。
作者：朱海明 ，賴(lài)蔚苳，盧勉飛，楊冰 ，王海燕 ，柯昌文 ，嚴紀文 ，王建
參考文獻：
[1]余潑．醫學(xué)微生物學(xué)[M]．北京：人民衛生出版社，1983，303 305．
[2]吳清平，周艷紅，蔡芷荷．衛生微生物特異性顯色培養基的研究與應用[J]．中國衛生檢驗雜志，2005，15(1)：124—126．
[3]盧勉飛，吳清平，劉云林，等．特異性酶反應在食源性致病菌檢測中的應用[J]．中國衛生檢驗雜志，2005，15(3)：354～356
1.4*109
傷寒沙門(mén)菌
淺紫紅色
1.97
7.3*108
品紅
0.95
6.8*108
2.2 顯色培養基的靈敏度 由表1可見(jiàn)，涂布相同濃度和劑量的4種沙門(mén)菌在兩種顯色培養基平板上，37℃培養24h后，菌落總數和菌落直徑結果均有差異。腸炎沙門(mén)菌在HK平板上的菌落數比在CHROMagar平板上約多5倍，湯卜遜沙門(mén)菌和傷寒沙門(mén)菌的結果較相近。傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar 培養基上菌落直徑(1.97mm)遠大于HK培養基(0.95mm)，其他3種沙門(mén)菌在HK培養基上的菌落大于CHROMagar培養基上的。
2.3 實(shí)際樣品檢測 40份實(shí)際樣品檢測出的陽(yáng)性菌株經(jīng)VITEK32的GNI+ 鑒定，結果詳見(jiàn)表2。
表2 三種培養基檢測40份樣品中沙門(mén)菌結果比較
|
樣品名稱(chēng) |
份數 |
DHL培養基 檢出數（%） |
CHROMagar檢出數（%） |
HK培養基檢出數（%） |
|
熟食 |
20 |
16（80.0） |
13（65.0） |
17（85.0） |
|
牛奶 |
10 |
9（90.0） |
9（90.0） |
9（90.0） |
|
生雞肉 |
10 |
9（90.0） |
9（90.0） |
9（90.0） |
|
總計 |
40 |
34（85.0） |
31（77.5） |
35（87.5） |
3 討論
沙門(mén)菌廣泛存在于自然界中，主要是通過(guò)食品(特別是動(dòng)物性食品)傳播、感染人體。國標法是目前國內絕大多數檢測機構都在使用的方法，由于其檢測周期長(cháng)、程序復雜、所需試劑繁多等缺點(diǎn)，已遠遠不能滿(mǎn)足現代檢測要求。顯色培養基法的原理是使用適當的熒光或顯色底物，在細菌特異性酶作用下，產(chǎn)生熒光或顯示一定顏色，用紫外燈觀(guān)察細菌產(chǎn)生的熒光或直接觀(guān)察菌落顏色，減少對菌株進(jìn)行純培養和生化鑒定步驟，可以把檢測、計數和鑒定一次完成，縮短檢測周期。
HKM和CHROMagar 培養基上的沙門(mén)菌呈現品紅或紫色的菌落與各自特異的酶底物和顯色劑有關(guān)。兩種培養基均能抑制金黃色葡萄球菌的生長(cháng)，大腸桿菌、費氏檸檬酸桿菌、奇異變形桿菌等雜菌或被抑制或菌落顏色與沙門(mén)菌有明顯差別。在CHROMagar培養基上，嗜水氣單胞菌和銅綠假單胞菌與沙門(mén)菌菌落顏色無(wú)法區別，而HK顯色培養基對這兩種菌有良好的抑制作用。從4種沙門(mén)菌的涂布培養結果可見(jiàn)，傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar培養基上的菌落較大，而HK培養基對某些沙門(mén)菌檢測的靈敏度比CHROMagar培養基多數倍，菌落直徑也明顯較大。
在實(shí)際樣品檢測中，3種培養基對牛奶、生雞肉中沙門(mén)菌的檢出率相同，而對熟食樣品檢出率差異較大，原因可能是熟食在生產(chǎn)加工的過(guò)程中添加的有機和無(wú)機成分種類(lèi)多且復雜，影響了酶與底物的反應，同時(shí)熟食較牛奶和生雞肉雜菌污染量大，使檢測結果出現一定比例假陽(yáng)性或假陰性，從而干擾目標菌的檢測，降低顯色培養基的敏感性和特異性。
綜上所述，顯色培養基在微生物檢測中的應用，可大大提高測效率，滿(mǎn)足應急需要。
作者：朱海明 ，賴(lài)蔚苳，盧勉飛，楊冰 ，王海燕 ，柯昌文 ，嚴紀文 ，王建
參考文獻：
[1]余潑．醫學(xué)微生物學(xué)[M]．北京：人民衛生出版社，1983，303 305．
[2]吳清平，周艷紅，蔡芷荷．衛生微生物特異性顯色培養基的研究與應用[J]．中國衛生檢驗雜志，2005，15(1)：124—126．
[3]盧勉飛，吳清平，劉云林，等．特異性酶反應在食源性致病菌檢測中的應用[J]．中國衛生檢驗雜志，2005，15(3)：354～356
