2 結果與分析
2.1生長(cháng)曲線(xiàn)
生長(cháng)曲線(xiàn)實(shí)驗每隔12h 取發(fā)酵液3 瓶，于600nm波長(cháng)下測量 OD 值，繪制成曲線(xiàn)，結果見(jiàn)圖1。
由圖1可知，接種時(shí)培養液的 OD 值為 0.175，培養到12h 時(shí)OD值為1.78，細菌生物量增長(cháng)了 9 倍多，到24 h 時(shí) OD值為3.01，細菌生物量增長(cháng)了16倍多，此期間細菌生物量的增加速度很快，生長(cháng)屬于對數生長(cháng)期；培養時(shí)間在24 ~ 36 h 之間時(shí)，細菌生物量基本保持不變，為生長(cháng)穩定期；培養36 h之后細菌開(kāi)始死亡，細菌生物量隨著(zhù)時(shí)間推移逐漸減少，進(jìn)入衰亡期。
2.2 培養時(shí)間對抗真菌素積累的影響
每隔12 h 取發(fā)酵液3 瓶，以 6000r/min 離心15 min，吸取上清液，進(jìn)行抗真菌效果實(shí)驗，結果見(jiàn)表1。由表1可以看出，剛接種的培養液在離心之后，盡管含有少量種子液，但其抗真菌素濃度太低，不足以抑制真菌生長(cháng)，因此在平板上看不到抑菌圈；隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng)，抗真菌素不斷累積，到48 h 時(shí)發(fā)酵液的抗菌活性最強，抑菌圈直徑達12.8 mm；之后抗真菌素活性逐漸減小，到96 h 時(shí)抑菌圈直徑僅為8.8 mm。由實(shí)驗結果可知，供試菌株發(fā)酵生產(chǎn)抗真菌素的最佳時(shí)間為培養48 h。
2.3 裝液量對抗真菌素積累的影響
在250 mL三角瓶中分別裝入 25、50、100、150、200 mL發(fā)酵液，研究裝液量對抗真菌素積累的影響，結果見(jiàn)表2。由表2 可知，在相同體積的三角瓶中，裝液量較少時(shí)，其溶氧系數較高，枯草桿菌產(chǎn)生抗真菌素
也較多，其中裝液量為50 mL 時(shí)，抗真菌素積累較多，抑菌圈直徑達14 mm。說(shuō)明裝液量50 mL 對抗真菌素積累的影響最大。
2.5 不同碳源對抗真菌素積累的影響
以葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、D-半乳糖和可溶性淀粉6種物質(zhì)為實(shí)驗碳源，質(zhì)量濃度均為0.5%，研究不同碳源對抗真菌素積累的影響，結果見(jiàn)表4。由表4可知，枯草芽孢桿菌BS - 06 生產(chǎn)抗真菌素的最佳碳源為麥芽糖，抑菌圈直徑達14.0 mm；其次為葡萄糖，抑菌圈直徑為11.5 mm。
2.6 麥芽糖濃度對抗真菌素積累的影響
枯草芽孢桿菌BS - 06在麥芽糖質(zhì)量濃度分別為0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%時(shí)，對發(fā)酵生產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響結果見(jiàn)表5。由表5可知，發(fā)酵液的抗真菌活性在麥芽糖濃度為2%時(shí)最高，抑菌圈直徑為14.6 mm。其他幾種麥芽糖濃度處理的抗真菌素活性基本接近。
2.7 不同氮源對抗真菌素積累的影響
選用牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、硫酸銨、硝酸銨和硝酸鉀6種物質(zhì)為實(shí)驗氮源，牛肉膏、酵母膏、蛋白胨濃度為0.5%，硫酸銨、硝酸銨和硝酸鉀的濃度為0.1%，考察它們對抗真菌素積累的影響，結果見(jiàn)表6。由表6可以看出，牛肉膏、酵母膏、蛋白胨和硝酸鉀都可以被枯草芽孢桿菌BS - 06 利用，并能產(chǎn)生抗真菌素，其中硝酸鉀為最佳氮源，抑菌圈直徑可達12.2 mm，可能是K+能夠提高抗真菌素的活性；硫酸銨、硝酸銨則對BS - 06產(chǎn)抗真菌素不利，可能是由于NH4+，抑制了抗真菌素的活性。
2.8 硝酸鉀濃度對抗真菌素積累的影響
研究了枯草芽孢桿菌BS - 06在硝酸鉀質(zhì)量濃度分別為0.05%、0.10%、0.15%、0.20%和0.25%時(shí)，對發(fā)酵生產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響，結果見(jiàn)表7。由表7可以看出，硝酸鉀濃度在0.05% ~ 0.2%的范圍內，抗菌物質(zhì)的活性隨硝酸鉀濃度升高而增大，最大抑菌圈直徑達15.5 mm；而硝酸鉀濃度超過(guò)0.2%時(shí)，抗菌物質(zhì)的活性則下降，抑菌圈直徑僅僅為9.8 mm。
2.9 不同濃度吐溫- 80對抗真菌素積累的影響
在培養基中添加不同濃度的非離子型表面活性劑吐溫- 80，結果發(fā)現0.1%、1%、10% 3種濃度均能促進(jìn)抗真菌素的活性，抑菌圈直徑分別為14.3、15.8、14.3 mm，其中以1%的濃度最佳，抑菌圈直徑比不添加吐溫- 80的對照（12.2 mm）增加近30%。這可能是因為吐溫80與枯草桿菌的細胞膜相互作用，增加了細胞膜的通透性，從而增加了抗真菌素向細胞外分泌的量。
2.10 抗真菌素的抗菌譜檢驗
在上述優(yōu)化條件下，研究了抗真菌素對節瓜枯萎病菌、冬瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌、稻瘟病菌的抗菌效果，結果5種致病菌的抑菌圈直徑分別為18.0、19.3、15.3、11.3、11.5 mm�？梢�(jiàn)，枯草芽孢桿菌BS - 06發(fā)酵產(chǎn)生的抗真菌素除了對水稻紋枯病菌具有良好的抗菌性外，對其他4種真菌均有較強的抑菌作用，有望開(kāi)發(fā)成為生物農藥，應用于農作物的真菌病害防治。
3 結語(yǔ)
本研究通過(guò)一系列單因素實(shí)驗，確定了枯草芽孢桿菌的最佳發(fā)酵條件為：培養時(shí)間48 h，裝液量為50 mL，初始pH值為8.0，培養基中添加2%麥芽糖、
0.2%硝酸鉀和1%吐溫 - 80�？莶輻U菌BS - 06產(chǎn)生的抗真菌素具有較廣的抗菌譜，對水稻紋枯病菌、稻瘟病菌、節瓜枯萎病菌、冬瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌均有較好的抗菌效果，有望開(kāi)發(fā)成生物農藥來(lái)防治農作物病原真菌。
本研究的后續研究工作擬對該抗真菌素進(jìn)行分離純化和結構鑒定，以及對其性質(zhì)進(jìn)行研究，以期為該抗真菌素在農作物真菌病害防治上的應用提供依據。
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