液體染色培養基用于白色假絲酵母菌的鑒定

關(guān)鍵詞： 液體染色培養基； 白色假絲酵母茵； 芽管； 厚膜孢子  

1 材料

1. 1  菌株來(lái)源  白色假絲酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48，熱帶假絲酵母菌ATCC750，克柔假絲酵母菌ATCC 6258，光滑假絲酵母菌ATCC 2238N L，近平滑假絲酵母茵ATCC 22019均由廣州樂(lè )通泰公司提供。由甘肅省臨床檢驗中心自門(mén)診和住院患者的痰液、尿液、糞便、分泌物等中分離的假絲酵母菌共146株，其中白色假絲酵母菌132株，熱帶假絲酵母菌 10株，克柔假絲酵母菌2株，光滑假絲酵母菌2株，均經(jīng) API-20CAUX卡鑒定證實(shí)。    

1．2 液體染色培養基主要試劑 葡萄糖、吐溫- 80、尿素等購自上�；�工試劑廠(chǎng)，蛋白胨購自廣州樂(lè )通泰公司。

1．3 正常人血清 醫院檢驗科生化室提供。  

2 方法   

2．1  菌液準備  將各種假絲酵母菌標準菌株及臨床分離株分別接種沙保弱瓊脂，35℃培養48h，挑取菌落，混勻2ml無(wú)菌蒸餾水中，在濁度儀上調整菌液濃度為4個(gè)麥氏單位 (約8×10⁸／m1)。 

2．2 液體染色培養基配制 選擇適合假絲酵母菌生長(cháng)繁殖的液體沙保弱培養基(100ml 蒸餾水中含葡萄糖5g，蛋白胨10g ) 作基礎^［1］， 在其中添加( NH₄) ₂ SO₄  0．05g，KH₂ PO ₄ 2 g， 

MgSO₄ 0．05g，CaCl₂ 0．05g。在上述培養基中添加刺激厚膜孢子形成的吐溫- 80 2.0 g，玉米粉1．0 g，氯霉素0．05g，調p H為6．0～6. 8。高壓滅菌后，加入經(jīng)過(guò)濾除菌的1mo／L 尿素0．03 ml，貯存備用。接種待測菌并培養后，往菌液中滴加l0 g／L美藍0．5 ml， 使生成的芽管和厚膜孢子著(zhù)色，便于鏡下觀(guān)察。 

2．3 液體染色培養基與人血清檢測芽管對比試驗 在無(wú)菌試管中分別加入0．5ml液體培養基或人血清，每管加入相應菌液100，置35℃溫育60、120、180min，分別用加樣器取菌液 100至載玻片上，高倍鏡下計數100個(gè)假絲酵母菌所產(chǎn)生的芽管數。 

2．4 厚膜孢子檢測 繼續培養24～72h后，取菌液于載玻片上，加蓋玻片在油鏡下觀(guān)察厚膜孢子。  

3 結 果

3．1  液體染色培養基與人血清檢測白色假絲酵母菌芽管結果見(jiàn)表1。 

表1  液體染色培養基與人血清檢測白色假絲酵母菌芽管比較

3．2 液體染色培養基測定芽管的特異性3h內，白色假絲酵母菌標準菌株( 4株) 和臨床分離株( 1 3 2株) 均產(chǎn)生芽管，而熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌及光滑假絲酵母菌標準

菌株和臨床分離株均不產(chǎn)生芽管。   

3．3       白色假絲酵母菌在液體染色培養基中形成的芽管及厚膜孢子。  

4 討論

本文報告的液體染色培養基適合各種假絲酵母菌生長(cháng)尤其在溫育30min后即可觀(guān)察到芽管的形成，適合白色假絲酵母菌快速檢驗。繼續培養24～72h，還可觀(guān)察到白色假絲酵母菌形成厚膜孢子。熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌光滑假絲酵母菌等在該培養基上3h內不產(chǎn)生芽管，因此該培養基特異性較強。與傳統的動(dòng)物血清法對比，在該培養基中芽管形成較快， 培養基成分為實(shí)驗室常用的化學(xué)試劑，來(lái)源、配制均較方便，無(wú)病原體存在，比常用的人血清安全，適合基層實(shí)驗室快速鑒定白色假絲酵母菌。能否利用該培養基對其他假絲酵母菌菌如熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌等進(jìn)行輔助鑒定如觀(guān)察假菌絲形態(tài)、尿素分解試驗等正在研究中。新鮮配制的培養基效果較好，高壓除菌后可用半年。 

作者：魏蓮花，張儉，鄒鳳梅，劉剛(甘肅省臨床檢驗中心，蘭州730000)  

參考文獻： 

[1]章強強，Vidotto V，Aceattatis G，等．葡萄糖對白色念珠菌芽管形成的影響[J]．中國皮膚性病雜志，1998，12 (3)：140．141．    

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