λ噬菌體的大規模培養：低倍數感染

1、緩沖液和溶液：

SM

氯仿

2、培養基：

NZCYM

3、載體和菌株：

高滴度的λ噬菌體原種

4、離心機和轉子：

Sorvall  SS-34或相當型號

5、專(zhuān)用設備：略

二、方法：

1、  接種大腸桿菌適宜菌株的單菌落至分裝在500ml錐形瓶的100mlNZCYM中，37℃劇烈振蕩培養過(guò)夜。

2、  測定培養物的OD600值，以1OD600=1×109個(gè)細胞/ml計算細胞濃度.

3、  取4份樣品，每份含1010個(gè)細胞，4000g（5800r/min 于Sorvall  SS-34）室溫離心10min，去上清。

4、  將每份細菌沉淀用3ml SM懸浮。

5、  加入適當數量的感染性噬菌體顆粒，振蕩使噬菌體充分分散于整個(gè)培養物中。

6、  將感染培養物37℃溫育20min，間或搖晃。

7、  將每份感染樣品加入到預熱至37℃的500ml NZCYM（于2L 燒瓶中），37℃劇烈振蕩培養（300r/min）.

8、  8h后開(kāi)始監視培養物的裂解情況。伴隨著(zhù)細菌和噬菌體的生長(cháng)，8-12h后裂解發(fā)生，如果觀(guān)察大裂解發(fā)生，轉入步驟10.

9、  假如12h后裂解不明顯，取小量培養物樣品，檢查噬菌體的生長(cháng)情況。

a．  取兩份感染培養物樣品（每份1ml）至玻璃試管中。

b．  每管中加入1至2滴氯仿（約50-100ml），37℃培養5-10min，間或搖晃。

c．  將每管置光線(xiàn)下比較培養物的外觀(guān)。如果接近完全感染但細胞還沒(méi)有裂解，氯仿將導致細胞破裂，從而使混濁的培養物變?yōu)橥该�。在這種情況下，轉入步驟10.

10、每個(gè)燒瓶中加入10ml氯仿，37℃繼續振蕩培養10min。

11、將培養物冷卻至室溫，隨之用方案6所述沉淀噬菌體顆粒。