除菌過(guò)濾器微生物截留的試驗分析

【關(guān)鍵詞】  除菌過(guò)濾器；缺陷假單胞菌；微生物截留；無(wú)菌保證程度

    除菌過(guò)濾器在藥品生產(chǎn)中主要用于無(wú)菌藥品的除菌過(guò)濾，除菌過(guò)濾是藥品生產(chǎn)過(guò)程中非常重要的一種除菌方式，特別是對非最終滅菌的注射劑而言，除菌過(guò)濾是消除藥液中微生物的唯一方法。通過(guò)對除菌過(guò)濾器濾芯材質(zhì)的選擇、滅菌方法、完整性測試以及細菌的截留試驗，確認除菌的效果，提高除菌過(guò)濾在注射劑生產(chǎn)過(guò)程中無(wú)菌保證程度重要性的認識。 

　　1  材料與方法 

　　1.1  試驗材料 

    (1)濾芯：濾膜材質(zhì)為聚醚砜，10英寸226卡式，孔徑：0.22 μm，級別：除菌級，濾膜面積：3 600 cm2。來(lái)源：頗爾過(guò)濾器(北京)有限公司。(2)全自動(dòng)過(guò)濾器完整性測試儀：上海先維過(guò)濾設備廠(chǎng)，型號：212A。(3)甘露醇：廣西南寧化學(xué)制藥有限公司，批號：0809110，配置20 kg 濃度為0.5%的水溶液。(4)微生物指示劑：缺陷假單孢菌(ATCC19146直徑0.3～0.4 μm)，北京鑫四環(huán)消毒技術(shù)開(kāi)發(fā)中心。(5)菌液濃度：每平方厘米應達到107個(gè)菌的挑戰水平。(6)培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基：北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司，批號:081111；營(yíng)養瓊脂：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200902081；營(yíng)養肉湯：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200901071。(7)試驗壓力：約為0.2 Mpa。(8)試驗流量：筒式過(guò)濾器2～3.86L/(m3·min)。 

　　1.2  方法 

　　1.2.1  濾芯的清洗  

　　將濾芯浸泡于0.1%氫氧化鈉溶液中12～24 h，取出用注射用水反復沖洗至沖洗水的pH值呈中性。 

　　1.2.2  完整性測試  

　　將過(guò)濾器與完整性測試儀連接，向經(jīng)過(guò)注射用水充分浸潤的過(guò)濾器(含濾芯)中通入壓縮空氣，觀(guān)察壓力表讀數的變化，當浸入液面下的導管出口處出現第1個(gè)氣泡時(shí)，讀取壓力表指示值，此壓力值即為濾器濾芯的起泡點(diǎn)壓力，壓力要求≥0.31 Mpa。

1.2.3  缺陷假單胞菌液的制備  

　　取缺陷假單胞菌的新鮮培養物少許，接種至營(yíng)養肉湯培養基中，于(32.5±2.5)℃培養18～24 h，活菌計數將上述培養物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成含菌<100 CFU/mL的菌液，稀釋級別：10��7，計數結果：27 CFU/mL。 

　　1.2.4  微生物截留試驗  

　　(1)過(guò)濾系統滅菌：將試驗所需的不銹鋼桶、硅膠管、過(guò)濾器及濾芯等置于脈動(dòng)真空滅菌器中于121 ℃滅菌30 min。(2)對照試驗：取1 000 mL甘露醇溶液(0.5%)用無(wú)菌過(guò)濾器壓濾，各取2份樣品，分別用薄膜過(guò)濾法處理后，一份作陰性對照，另一份在最后1次沖洗液中加入缺陷假單胞菌菌液1 mL(<100 CFU/mL),取濾膜置于硫乙醇酸鹽流體培養基中培養作為陽(yáng)性對照，對照試驗培養(33 ℃,14 d)均符合規定。(3)截留試驗：將缺陷假單胞菌液360 mL加入余量0.5%甘露醇溶液中攪拌均勻，取1 mL按中國藥典2005年版2部附錄Ⅺ J微生物限度檢查法進(jìn)行檢查，計數過(guò)濾前液體的微生物數量。然后將菌液全部用過(guò)濾器濾過(guò)，取1 000 mL按過(guò)濾前藥液微生物數量檢查法同法操作，計數過(guò)濾后的液體的微生物數量。計算被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數量(N0)與過(guò)濾后的微生物數量(N)比的常用對數值,即：LRV=1gN0��1gN=7.8。(4) 過(guò)濾后濾器的完整性測試將過(guò)濾之后的除菌濾器再次進(jìn)行起泡點(diǎn)測試，確認試驗過(guò)程中濾膜的完整性。 

　　2  結果 

    藥液過(guò)濾前的微生物的數量與藥液過(guò)濾后的微生物數量比的常用對數值為7.8，大于標準規定值7，結果見(jiàn)表1。證明除菌級濾芯可達到每平方厘米107個(gè)菌的截留效果，完全符合非最終滅菌注射劑的生產(chǎn)工藝要求。表1  微生物截留試驗結果（略） 

　　3  討論 

    除菌過(guò)濾器微生物截留試驗結果表明，孔徑為0.22 μm除菌級濾芯對微生物的截留試驗可達到LRV大于7的微生物截留效果，達到除菌的目的。但是與其他滅菌方法相比，除菌過(guò)濾的風(fēng)險最大，實(shí)際生產(chǎn)中宜安裝第2只已滅菌的除菌過(guò)濾器再過(guò)濾1次藥液，最終的除菌過(guò)濾器應盡可能接近灌裝點(diǎn)。因此，對于采用除菌過(guò)濾和無(wú)菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的注射劑產(chǎn)品，在除菌過(guò)濾時(shí)，被過(guò)濾產(chǎn)品總的微生物污染量應控制在規定的限度內。要達到這一目的，應在無(wú)菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作，相關(guān)的設備、包裝容器、膠塞及其他物品應采用適當的方法進(jìn)行滅菌，并防止再次污染。對生產(chǎn)用原輔料還應進(jìn)行微生物限度的檢查，以降低其微生物負載率，通過(guò)整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程的嚴格控制，采用經(jīng)驗證確認的除菌過(guò)濾和無(wú)菌生產(chǎn)的工藝，產(chǎn)品的無(wú)菌是能夠得到保證的。

作者：劉春燕，吳清剛，黎李，陳艷

【參考文獻】

  　　1 國家藥典委員會(huì ).中華人民共和國藥典(2部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.附錄：93��94,169��170.

　　2 國家食品藥品監督管理局.藥品生產(chǎn)驗證指南［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2003.123��130.

　　3 蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學(xué)檢驗技術(shù)［M］.北京:華齡出版社,2007.300��311.

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