微生物發(fā)酵對溪黃草抑菌效果的影響（1）

【摘要】  　　目的用不同菌種發(fā)酵和用纖維素酶預處理溪黃草，初步探討發(fā)酵對溪黃草抑菌效果影響的機制，為開(kāi)發(fā)廉價(jià)的食品添加劑，抑菌藥物和節約藥材資源提供新的研究途徑。方法對溪黃草進(jìn)行發(fā)酵等處理后，檢測其醇提物的抑菌作用。結果微生物發(fā)酵對溪黃草抑菌效果存在一定的影響，酵母發(fā)酵能明顯提高抑菌效果，與用纖維素酶處理的效果相似。結論利用合適菌種發(fā)酵提高藥材有效成分的利用率是可行的。  

【關(guān)鍵詞】  發(fā)酵； 溪黃草； 抑菌效果 

　　溪黃草系唇形科香茶菜屬植物Rabdosia serra (Maxim.)Hara，由于和中藥大辭典上所收錄的中藥溪黃草的原植物線(xiàn)紋香茶菜Rabdosia striatus (Benth.) Kodo外形相似而常作溪黃草入藥，而且是廣東藥材市場(chǎng)上中藥溪黃草的主流品種之一，用于清熱利濕、涼血散瘀，治療急性黃疸性肝炎、急性膽囊炎等［1］。   

　　目前關(guān)于溪黃草抑菌效果方面的研究，主要考慮將溪黃草的提取物作為一種健康的食品添加劑。姚勇芳［2］研究了溪黃草中抑菌物質(zhì)的最佳提取條件，并驗證了溪黃草的乙醇提取物對大腸桿菌具有抑制作用，對霉菌抑制效果不明顯；戰宇等［3］研究了溪黃草提取物的抑菌效果；梁盛年等［4］測定了溪黃草乙醇提取物的體外抗菌活性；段志芳等［5］還證實(shí)溪黃草水提物對楊桃果實(shí)具有一定的保鮮作用。 

　　發(fā)酵法一直是中藥炮制方法之一，隨著(zhù)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)酵法應用范圍更加廣泛。這種方法借助微生物的作用，改變中藥原有藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應癥［6，7］。本研究以枯草桿菌、乳酸菌和酵母菌為發(fā)酵菌種，研究發(fā)酵后的溪黃草醇提物對細菌和霉菌生長(cháng)的抑制效果，為高效提取溪黃草抑菌有效成分，大規模生產(chǎn)高效、低毒、廣譜而經(jīng)濟實(shí)用的食品防腐劑、抑菌藥物以及對于循環(huán)利用和處理每年藥廠(chǎng)大量廢棄的藥渣提供了新的途徑和方法。 

　　1  材料 

　　溪黃草購自梅州市溫記百草堂，經(jīng)嘉應學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院廖富林教授鑒定為Rabdosia serra (Maxim.)Hara。美樂(lè )多購自梅州市太平洋商場(chǎng)。干酵母粉, 廣東丹寶利酵母有限公司 。 枯草桿菌、JY-LZ乳酸芽孢桿菌、大腸桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉、青霉菌保藏于嘉應學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗室。纖維素酶（綠色木酶），酶活力>15μ/mg，上海伯奧生物科技有限公司。 

　　2  方法 

　　2.1  工藝流程溪黃草→粉碎→稱(chēng)取5 g→加入水或培養基→高壓滅菌(121℃，20 min)→按10%接種量接種發(fā)酵菌種→于培養箱中靜止10 d→提取→測定抑菌活性。 

　　2.2  發(fā)酵 

　　2.2.1  種子培養基枯草桿菌種子培養基：蛋白胨1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.15%；pH 7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20 min。   

　　乳酸芽孢桿菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖1％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。 

　　酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30 min。 

　　2.2.2  發(fā)酵培養基枯草桿菌發(fā)酵培養基：蛋白胨1%；葡萄糖1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.5%；pH7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20 min。　　

    乳酸芽孢桿菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖2.5％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。   

　　美樂(lè )多乳酸菌培養基：雀巢脫脂奶粉2%；葡萄糖1%；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌15 min。   

　　酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30 min。 

　　2.2.3  種子培養將活化后的斜面枯草桿菌、乳酸芽孢桿菌分別挑取兩接種環(huán)于相應的液體培養基中，接種后分別置于37℃培養箱中培養24 h。 

　　2.2.4  發(fā)酵培養稱(chēng)取5 g粉碎的溪黃草于100 ml的三角瓶?jì)�，加�?SPAN lang=EN-US>30 ml蒸餾水， 121℃滅菌20 min。每瓶加入種子菌液3 ml，于適宜的溫度下靜止培養。同時(shí)做4種對照，即有5組實(shí)驗：Ⅰ：溪黃草+水+菌；Ⅱ：溪黃草+水；Ⅲ：溪黃草+培養基+菌； Ⅳ：溪黃草+培養基；Ⅴ：培養基+菌。   

　　發(fā)酵：將枯草桿菌系列，乳酸芽孢桿菌系列，美樂(lè )多乳酸菌系列置于(36±1)℃的恒溫培養箱中靜置10d，干酵母菌系列于(28±1)℃的恒溫培養箱中靜置10 d。 

　　2.2.5  發(fā)酵前后菌數量的檢測平板計數法，3個(gè)重復。 

　　2.3  抑菌物質(zhì)的提取稱(chēng)取5 g的溪黃草置于3角瓶中，加入30 ml 95%的乙醇，于70℃的恒溫水浴鍋中水浴2 h后，濾紙過(guò)濾，取濾液，將其于同溫度的水浴鍋中揮干濃縮至稠膏狀，再加入95%的乙醇溶解并定容至10 ml。定容后放入冰箱中保藏備用。 

　　發(fā)酵后的4個(gè)系列4 800 r/min離心20 min，固形物按上法處理。 

　　纖維素酶處理及抑菌物質(zhì)提�。悍謩e稱(chēng)取纖維素酶0.010 8 g和0.031 0 g，加入含5g溪黃草和30ml蒸餾水的三角瓶中，加入后放入55℃的恒溫水浴鍋中，水浴2 h后取出，濾紙過(guò)濾，濾渣按上法處理。 

　　2.4  抑菌活性的檢測指示菌種活化后用無(wú)菌生理鹽水制成106～107 cfu/ml菌懸液。　　

　　取0.2 ml菌懸液涂布于牛肉膏蛋白胨或PDA培養基上，靜置10min。 

　　待測樣品用無(wú)菌毛細吸管吸取管長(cháng)的1/3后，滴于直徑為5 mm的無(wú)菌濾紙片上，每個(gè)平板上貼3片，分別做兩個(gè)平行。95%乙醇作對照。   

將貼了濾紙片的平板放入恒溫培養箱中，靜置30 min后倒置培養，大腸桿菌和白葡萄球菌培養24 h取出，黑曲霉和青霉培養48h后取出，用游標卡尺測量其抑菌圈直徑。

上一篇：病原微生物耐藥性變異的防治對策

下一篇：微生物發(fā)酵對溪黃草抑菌效果的影響（2）