樣品制備是顯微技術(shù)的一個(gè)重要環(huán)節，直接影響著(zhù)顯微觀(guān)察效果的好壞。一般來(lái)說(shuō)，在利用顯微鏡觀(guān)察、研究生物樣品時(shí)，除要根據所用顯微鏡使用的特點(diǎn)采用合適的制樣方法外，還應考慮生物樣品的特點(diǎn)，盡可能地使被觀(guān)察樣品的生理結構保持穩定，并通過(guò)各種手段提高其反差。
1. 光學(xué)顯微鏡的制樣
光學(xué)顯微鏡是微生物學(xué)研究的最常用工具，有活體直接觀(guān)察和染色觀(guān)察二種基本使用方法。
(1) 活體觀(guān)察
可采用壓滴法、懸滴法及菌絲埋片法等在明視野、暗視野或相差顯微鏡下對微生物活體進(jìn)行直接觀(guān)察。其特點(diǎn)是可以避免一般染色制樣時(shí)的固定作用對微生物細胞結構的破壞，并可用于專(zhuān)門(mén)研究微生物的運動(dòng)能力、攝食特性、及生長(cháng)過(guò)程中的形態(tài)變化如細胞分裂、芽孢萌發(fā)等動(dòng)態(tài)過(guò)程。
�、賶旱畏ǎ簩⒕鷳乙旱斡谳d玻片上，加蓋蓋玻片后立即進(jìn)行顯微鏡觀(guān)察；
�、趹业畏ǎ涸谏w玻片中央加一小滴菌懸液后反轉置于特制的凹載玻片上后進(jìn)行顯微鏡觀(guān)察。為防止液滴蒸發(fā)變干，一般還應在蓋玻片四周加封凡士林；
�、劬z埋片法：將無(wú)菌小塊玻璃紙鋪于平板表面，涂布放線(xiàn)菌或霉菌孢子懸液，經(jīng)培養，取下玻璃紙置于載玻片上，用顯微鏡對菌絲的形態(tài)進(jìn)行觀(guān)察。
(2) 染色觀(guān)察
一般微生物菌體小而無(wú)色透明，在光學(xué)顯微鏡下，細胞體液及結構的折光率與其背景相差很小，因此用壓滴法或懸滴法進(jìn)行觀(guān)察時(shí)，只能看到其大體形態(tài)和運動(dòng)情況。若要在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察其細致形態(tài)和主要結構，一般都需要對它們進(jìn)行染色，從而借助顏色的反襯作用提高觀(guān)察樣品不同部位的反差。
染色前必須先對涂在載玻片上的樣品進(jìn)行固定，
其目的有二：一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上，二是增加其對染料的親和力。
常用酒精燈火焰加熱和化學(xué)固定二種方法。固定常常利用高溫，手執載玻片的一端（涂有標本的遠端），標本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來(lái)回通過(guò)3—4次，共約2—3秒鐘，并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺(jué)過(guò)燙為宜（不超過(guò)60℃）,放置待冷后，進(jìn)行染色。
以上這種固定法在微生物實(shí)驗室中雖然應用較多普遍，但是應當指出，在研究微生物細胞結構時(shí)不適用，應采用化學(xué)固定法�；瘜W(xué)固定法最常用的固定劑有：酒精（95%），酒精和醚各半的混合物，丙酮，1—2%的餓酸等。餓酸能很快固定細胞但不改變其結構，故較常用。應用餓酸固定細胞的技術(shù)如下：在培養皿中放一玻璃，在玻璃上放置玻璃毛細管，在毛細管中注入少量的1—2%餓酸溶液，同時(shí)在玻璃上再放置濕標本涂片的載玻片，然后把培養皿蓋上，經(jīng)過(guò)1—2分鐘后把標本從培養皿中取出，并使之干燥。
固定時(shí)應注意盡量保持細胞原有形態(tài)，防止細胞膨脹和收縮。而染色則根據方法和染料等的不同可分為很多種類(lèi)，如細菌的染色，可簡(jiǎn)單概括如下：
抗酸染色法： 抗酸桿菌類(lèi)一般不易著(zhù)色，需用強濃染液加溫或延長(cháng)時(shí)間才能著(zhù)色，但一旦著(zhù)色后即使用強酸、強堿或酸酒精也不能使其脫色。其原因有二：一是細菌細胞壁含有豐富的蠟質(zhì)(分支菌酸)，它可阻止染液透人菌體內著(zhù)染，但一旦染料進(jìn)入菌體后就不易脫去；二是菌體表面結構完整，當染料著(zhù)染菌體后即能抗御酸類(lèi)脫色，若胞膜及胞壁破損，則失去抗酸性染色特性。
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