酸奶中嗜熱鏈球菌的分離及鑒定（1）

1.  材料與方法

1.1分離培養基

BCG牛乳培養基 ：

 ( A) 溶液： 脫脂乳粉2 0 g，水1000mI，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2mL 80℃滅菌 20min

( B ) 溶液： 酵母膏 2g，水100mI，瓊脂 4g，121℃濕熱滅菌20min。以無(wú)菌操作趁熱將( A) ( B ) 溶液混合均勻后倒 8個(gè)平板。

乳酸菌葡萄糖發(fā)酵培養基 蛋白胨0.5g，牛肉膏0.5g，酵母膏0.5g， 吐溫 8 0 0.05ml，葡萄糖1g， 蒸餾水100ml， 加入1.6%溴甲酚紫溶液約0.14ml。以上成分溶解后調pH到 6.8 ～7.0分裝到10只試管中。每只試管里再放置一支德拉姆氏小管。105℃濕熱滅菌 15min。

 牛乳培養基 12g全脂奶粉，加水100mL加入10g 葡萄糖，溶解后分裝，105℃滅菌15min， 取出備用。 

1.2實(shí)驗方法

嗜熱鏈球菌分離與純化  將新鮮酸奶采用稀釋平板涂布法進(jìn)行平板涂布分離。挑取培養基上的黃色菌落( 菌落周?chē)�培養基變?yōu)辄S色)，采用劃線(xiàn)法進(jìn)行分離純化，獲得純菌種。

菌種的革蘭氏染色和形態(tài)觀(guān)察  將分離的純菌種接種在BCG牛乳培養基上，40℃培養28h，用無(wú)菌接種環(huán)取一環(huán)菌均勻涂布在滴有無(wú)菌水的載玻片上，自然風(fēng)干。固定后進(jìn)行革蘭氏染色。染色后用顯微鏡油鏡進(jìn)行觀(guān)察。

發(fā)酵產(chǎn)物鑒定——紙層析法  將分離的純菌種接種到乳酸菌葡萄糖發(fā)酵培養基上， 40℃培養48h。取產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的液體試管中發(fā)酵液做紙層析。展開(kāi)劑：水30mL、 苯甲醇150mL、 正丁醇150mL、甲酸3.3mL。 顯色劑 ： 將1.6%的溴酚藍酒精溶液用0.1 mol／L的 NaOH 調pH到6.7。顯色后，分別測定發(fā)酵液與2%標準乳酸的Rf值，確定發(fā)酵產(chǎn)物中是否有乳酸。

牛奶發(fā)酵實(shí)驗 將分離的純菌種活化后，以2%的接種量接入牛乳培養基中，搖勻后，將瓶蓋擰緊密封。將三角瓶置于40℃恒溫箱中培養，出現凝固后轉入4℃冰箱中冷藏24h。

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