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    Hirt法快速提取腺病毒DNA



    錄入時(shí)間:2011-9-9 16:18:21 來(lái)源:生物在線(xiàn)

    取腺病毒以m.o.i=5病毒量感染293細胞,待細胞病變達+++~++++時(shí)收獲。

    沉淀細胞加2m1 TE重懸,分裝四個(gè)1.5ml Eppendorf管,

    每管加蛋白酶K(20μg/μl)7μl和10% SDS 50μl,37 C孵育1 h,
    再加5mol/L NaCI 150μl置于4℃反應2ho 13,000rpm離心30min,
    轉移上清,用等體積酚、酚一氯仿/異戊醇、氯仿/異戊醇各抽提一次,
    抽提上清加入1/10體積2.5mol/L的乙酸鈉(pH5.2)和2倍體積無(wú)水乙醇,置-20℃ 30min或O/N。

    13,000rpm離心l0min棄上清,

    75%乙醇洗兩遍,于室溫晾干后,每個(gè)1.5m1 Eppendorf管加50μl TE溶解。

     

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