總結
一種高效的原核表達載體需要包括一個(gè)強大并且可以嚴緊調節的啟動(dòng)子；一位于翻譯起始密碼子5’端大約9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一個(gè)高效轉錄終止子。除此之外，載體還需要一個(gè)復制起點(diǎn)，篩選標記和利于對啟動(dòng)子活性進(jìn)行嚴緊調節的基因。這種調節元件可以插入載體自身，也可以插入宿主的染色體。其他的元件包括轉錄和翻譯增強子等。這些元件的作用往往具有基因特異性，因此要根據不同的情況加以取舍。我們在綜合國內外研究的基礎上，對有可能影響E.coli中蛋白質(zhì)高效表達的多種因素進(jìn)行了總結。盡管目前在E.coli中表達外源基因方面已經(jīng)有許多重大進(jìn)展，但仍有許多問(wèn)題亟待解決。歸納起來(lái)主要有以下幾點(diǎn)：
1． 借助于細胞的分子伴侶機制來(lái)提高正確折疊的蛋白質(zhì)的產(chǎn)量�；蛟S可以通過(guò)共表達多種分子伴侶編碼基因和通過(guò)激細胞內眾多不同的分子伴侶的方法來(lái)實(shí)現。
2．在E.coli中表達真核膜蛋白和多亞基蛋白質(zhì)復合物的難題上有待解決。
3． 蛋白質(zhì)分泌到培養基中的真正和有效機制需要明了。目前已經(jīng)有多種體系能夠是重組蛋白質(zhì)分泌到培養基中。其中有些是利用信號肽、融合伴侶和具有穿透能力的因子，這種因子能夠引起外膜的破壞和有限的滲漏。而另外的策略是利用已經(jīng)存在的分泌通道，來(lái)保證更高特異性的分泌。有關(guān)這方面的工作需要對E.coli中眾多分泌通道的更多了解。
4． 賦予原核細胞諸如真核細胞那樣進(jìn)行翻譯后修飾的能力。例如糖基化、磷酸化、乙�；王０被��？梢酝ㄟ^(guò)將合適的真核細胞酶類(lèi)轉入E.coli中而達到這些目的。
總之，E.coli作為一種原核表達系統具有多方面的優(yōu)點(diǎn)，加之在許多技術(shù)方面的眾多重大進(jìn)展。E.coli仍然是基礎研究和商業(yè)生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)的強有力工具。
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