DNA提取的材料、設備及試劑

　　一、材料

　　含pBS的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料離心管(又稱(chēng)eppendorf管),離心管架。

　　二、設備

　　微量取液器(20μl,200μl,1000μl)，臺式高速離心機，恒溫振蕩搖床，高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)，渦旋振蕩器，電泳儀，瓊脂糖平板電泳裝置和恒溫水浴鍋等。

　　三、試劑

　　1、LB液體培養基(Luria-Bertani) ：稱(chēng)取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于800ml去離子水中，用NaOH調pH至7.5, 加去離子水至總體積1升,高壓下蒸氣滅菌20分鐘。

　　2、LB固體培養基：液體培養基中每升加12g瓊脂粉,高壓滅菌。

　　3、氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)母液：配成50mg/ml水溶液, -20℃保存備用。

　　4、溶菌酶溶液：用10mmol/L Tris•Cl(pH8.0)溶液配制成10mg/ml,并分裝成小份(如1.5ml)保存于-20℃,每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。

　　5、3mol/l NaAc (pH5.2)：50ml水中溶解40.81g NaAc•3H2 O,用冰醋酸調pH至5.2, 加水定容至100ml, 分裝后高壓滅菌,儲存于4℃冰箱。

　　6、溶液Ⅰ：50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0)，10mmol/L EDTA (pH8.0)。溶液Ⅰ可成批配制,每瓶100ml,高壓滅菌15分鐘,儲存于4℃冰箱。

　　7、溶液Ⅱ：0.2 mol/L NaOH (臨用前用10mol/L NaOH母液稀釋)，1％SDS。

　　8、溶液Ⅲ：5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸11.5ml，H2O 28.5ml，定容至100ml, 并高壓滅菌。溶液終濃度為: K+ 3mol/L, Acˉ5mol/L。

　　9、RNA酶A母液：將RNA酶A溶于10mmol/L Tris•Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl中,配成10mg/ml的溶液,于100℃加熱15分鐘,使混有的DNA酶失活。冷卻后用1.5ml eppendorf管分裝成小份保存于-20℃。

　　10、飽和酚：市售酚中含有醌等氧化物,這些產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂及導致RNA和DNA的交聯(lián),應在160℃用冷凝管進(jìn)行重蒸。重蒸酚加入0.1％的8-羥基喹啉(作為抗氧化劑),并用等體積的0.5mol/L Tris•Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris•Cl(pH8.0)緩沖液反復抽提使之飽和并使其pH值達到7.6以上,因為酸性條件下DNA會(huì )分配于有機相。

　　11、氯仿:按氯仿:異戊醇＝24:1體積比加入異戊醇。氯仿可使蛋白變性并有助于液相與有機相的分開(kāi),異戊醇則可起消除抽提過(guò)程中出現的泡沫�！　“大w積/體積＝1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚/氯仿(1:1)。酚和氯仿均有很強的腐蝕性，操作時(shí)應戴手套。

　　12、TE緩沖液：10 mmo/L Tris•Cl (pH8.0)，1 mmol/L EDTA (pH8.0)。高壓滅菌后儲存于4℃冰箱中。

　　13、STET：0.1 mol/L NaCl，10mmol/L Tris•Cl(pH8.0)，10 mmol/L EDTA (pH8.0)，5% Triton X-100。

　　14、STE：0.1mol/L NaCl，10mmol/L Tris•Cl(pH8.0)，1mmol/L EDTA (pH8.0)。

　　15、電泳所用試劑：（1）TBE 緩沖液(5×)：稱(chēng)取Tris 54g，硼酸27.5g，并加入0.5M EDTA (pH8.0) 20ml，定溶至1000ml。（2）上樣緩沖液(6×)：0.25% 溴酚藍，40% (w/v) 蔗糖水溶液。

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