包涵體表達的蛋白的復性（四）

幾個(gè)復性的實(shí)例：

1、MHCII JBC 269（47）：1994

增溶：16-40mg Protein,8MGdnHCl,16-32mM DTT,1mM EDTA,50mM Tris pH8.037度1hr.

復性：8-16fold dilution to1-5mg/ml Protein.

2、增溶：10mM DTT,0.1%SDS,25mM Tris,200mMGlucine pH8.5.

復性：10倍稀釋到10mM DTT,2mMDodOMalt(dodecyl-beta-D-maltoside),150mMNaCl,10mMTris pH8.0.對起始緩沖液密閉透析16hr，開(kāi)口透析8hr，對150mMNaCl,10mM Tris pH8.0透析48hr。

3、Bovine Prethrombin-2,JBC 270(1):1990 四對二硫鍵。

增溶：7M GdnHCl,10mMTris pH8.0,1mM EDTA 4mg/ml.

復性：稀釋到100mM Na2HPO4,2 mM EDTA,0.1% PEG,0-4M GdnHCl,0.1 mM GSSG,0.2 mM GSH,pH7.4,0.025 mg/ml Protein.RT 24hr.對4L 25mM sodiumphosphate,2mM EDTA,0.1%PEG,pH7.4 透析3次，溫度4度。

純化：

一般說(shuō)來(lái)，復性液的體積較大，為了減少處理體積，在進(jìn)行柱純化以前可以先進(jìn)行硫酸銨沉淀，沉淀在低速離心收集后復溶的鹽濃度較高，可以直接進(jìn)行HIC純化，目標峰經(jīng)適當稀釋后（cond<5mS/cm）進(jìn)行IEX純化，然后通過(guò)SEC脫鹽，更換緩沖液，除菌過(guò)濾后，在質(zhì)量合格的情況下便可以進(jìn)入制劑階段。

當然在復性濃度較高的情況下，也可以直接將復性液進(jìn)行IEX純化，優(yōu)點(diǎn)是在純化的同時(shí)進(jìn)行體積的濃縮，為以后的精制創(chuàng )造條件。

從生產(chǎn)的角度看，由于每增加一步純化工序便降低很多收率，所以可過(guò)兩到三次柱純化，工藝越簡(jiǎn)單越有利于收率的提高。當然這只是一個(gè)一般的原則，對于純度要求較高的產(chǎn)品如重組人白蛋白，不得不進(jìn)行多次純化。

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