無(wú)血清技術(shù)及其培養基（一）

經(jīng)歷了天然培養基、合成培養基后，無(wú)血清培養基和無(wú)血清培養成為當今細胞培養領(lǐng)域的一大趨勢。采用無(wú)血清培養可降低生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。

無(wú)血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長(cháng)時(shí)間生長(cháng)繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的完全培養基可以滿(mǎn)足大部分細胞培養的要求，但對有些實(shí)驗卻不適合，如觀(guān)察一種生長(cháng)因子對某種細胞的作用，這時(shí)需要排除其他生長(cháng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(cháng)因子；又如需要測定某種細胞在培養過(guò)程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長(cháng)因子）的能力；或者要大規模的培養某種細胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無(wú)血清培養基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標。

一、無(wú)血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。

用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細胞在體外培養時(shí)，多數呈貼壁生長(cháng)或兼性貼壁生長(cháng)；而當其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養基中生長(cháng)時(shí)，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長(cháng)。

添加組分包括以下幾大類(lèi)物質(zhì)

(1）促貼壁物質(zhì)：許多細胞必須貼壁才能生長(cháng)，這種情況下無(wú)血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著(zhù)重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。

(2）促生長(cháng)因子及激素：針對不同細胞添加不同的生長(cháng)因子。激素也是刺激細胞生長(cháng)、維持細胞功能的重要物質(zhì)，有些激素是許多細胞必不可少的，如胰島素。

(3）酶抑制劑：培養貼壁生長(cháng)的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無(wú)血清培養基中必不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。最常用的是大豆胰酶；抑制劑。

(4）結合蛋白和轉運蛋白：常見(jiàn)如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無(wú)血清培養基都含有牛血清白蛋白。

(5)微量元素：硒是最常見(jiàn)的。

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