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1.如何選用培養基？
培養某一類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(cháng)�？傊�，首選MEM做粘附細胞培養、RPMI- 1640做懸浮細胞培養，各種目的無(wú)血清培養的首選是AIM V培養基（SFM）
2.為什么要熱滅活血清？
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養ES細胞、昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
3.L－谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L－谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L－谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終確定。L－谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
4.GlutaMAX-I是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩定？
GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，將其不穩定的α－氨基用L－丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L－谷氨酰胺幾乎完全降解。
5.為什么培養基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。
6.如何用臺盼蘭計數活細胞？
用無(wú)血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個(gè)/毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鐘后，用血球計數板計數細胞�；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。
7.如何消除組織培養的污染？
重要的培養污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè )菌素時(shí)尤其重要。
下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實(shí)驗步驟:
1 在無(wú)抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
2 分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個(gè)小培養瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3 每天觀(guān)測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
4 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2－3代。
5 在無(wú)抗生素的培養基中培養細胞一代。
6 重復步驟4。
7 在無(wú)抗生素的培養基中培養4－6代，確定污染是否以已被消除。
8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
9.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀？
GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預老化，儲存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
10.目錄上說(shuō)，Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什么？Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle’s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，碳酸氫鈉的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會(huì )變堿，Hanks液在CO2培養箱中會(huì )變酸。如果希望在 CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。
11.Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差別?
Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清執行的所有的標準檢驗程序，而且除了這些標準檢測，Certified胎牛血清還有如下一些附加的檢測：
End-Point Determination of Endotoxin Content
噬菌體檢驗
生物化學(xué)檢測
激素的檢測
血紅蛋白檢測
Sf9 細胞生長(cháng)促進(jìn)及方法學(xué)檢測
12.二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？
二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來(lái)自培養基中所有的二價(jià)離子。
13.制備 lipid-DNA的方法會(huì )影響轉染效率嗎？
是的。對于LIPOFECTAMlNE Reagent，稀釋試劑在100μl OPTI-MEM中，稀釋DNA在100μl OPTI-MEM中�；旌蟽煞N溶液在室溫下孵育15分鐘。對于LIPOFECTIN Reagent，在加入DNA溶液前允許稀釋的試劑和培養基孵育至少30分鐘可以增加3倍的效率。確保復合物在沒(méi)有血清的情況下形成。孵育15分鐘后，在復合物中加入含有血清的培養基（800μl）。（注意以上是35mm培養皿使用體積）。對于LIPOFECTAMlNE Plus Reagent DNA應該在與脂質(zhì)體混合之前首先與Plus Reagent混合。LIPOFECTAMlNE 2000的操作步驟允許在一個(gè)很小的體積下混合DNA和脂質(zhì)體，接下來(lái)可以不需要換培養基的情況下直接加入。對于每一種脂質(zhì)體的詳細的信息可以參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
14.我使用SF900 Ⅱ時(shí)，細胞生長(cháng)良好，但是為什么我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces 液和10%胎牛血清時(shí)效果好？
如果目的蛋白是一個(gè)后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會(huì )作用于目的蛋白。在加有血清的培養基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無(wú)血清配方中，蛋白酶作用的唯一底物是你的目的蛋白。為了避免這一問(wèn)題，加入一些蛋白酶抑制劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。
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