植物病毒病檢測方法（二）

1.4.2血清學(xué)方法

血清學(xué)方法原理是利用抗原抗體的體外特異性結合檢測植物病毒。主要包括沉淀反應、凝聚反應、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫電鏡（IEM）、放射免疫測定（RIA）、PCR（聚合酶蓮式反應）法等。

沉淀反應 將可溶性抗原與相應的抗體混合，當兩者的比例合適，并有鹽類(lèi)存在時(shí)，即有沉淀物出現，叫做沉淀反應。由于沉淀物主要是由抗體球蛋白所組成，為了保證有足夠的抗體，因此試驗時(shí)通常要稀釋抗原，不稀釋抗體。

凝聚反應 在微生物細胞懸液中，加入含有特異性抗體的血清，有一定濃度的電解質(zhì)，微生物細胞凝聚成團，叫做凝聚反應。分為直接凝聚反應與間接凝聚反應。由于病毒是可溶性抗原，必須把病毒的抗體先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的顆粒表面，然后與相應的抗原結合反應。用于吸附抗體的顆粒有皂土、乳膠、炭末、紅細胞等。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme linked Immunosorbent assay，簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA）將酶標記物同抗原抗體復合物的免疫反應與酶的催化放大作用相結合,既保持了酶催化反應的敏感性,又保持了抗原抗體反應的特異性,因而極大的提高了靈敏度；同時(shí)它又是一種非均相分析過(guò)程,即在反應中的每一步之后都有洗滌過(guò)程,從而排除了未反應物質(zhì)的干擾。自1976年 Voller和Clark等首次將ELISA應用于植物病毒檢測,已形成多種測試方法。常用的方法有有細胞直接法、細胞間接法、競爭法、酶抗酶法、雙夾心法（Double sandwich method）、雙抗體夾心法（Double antibody sandwich method）測定方式(侯義龍,2000)。這種方法的靈敏度高（可測出1－10納克/毫升的濃度），特異性強，操作簡(jiǎn)便，已廣泛應用于病毒測定和診斷（盛樹(shù)力，1978；馬德芳等,1981）。

免疫電鏡（IEM）是用電鏡檢測抗體特異性結合于抗原的技術(shù)。Anderson等（1961）和Lafferty與Oertelis（1961）發(fā)展了這一方法。其靈敏度高于ELISA。

放射免疫測定（RIA）在抗原抗體反應體系中，當同位素標記抗原（Ag*）與有限量的抗體相互作用時(shí)，形成有標記抗原的復合物（Ag*Ab）。如下式所示：

Ag*＋Ab Ag*Ab

Ag AgAb

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