植物病毒病檢測方法（一）

植物病毒病是農業(yè)生產(chǎn)上一種重要病害，嚴重影響農作物的產(chǎn)量和質(zhì)量, 目前還沒(méi)有1種治療效果較理想的藥劑，對發(fā)病植株做到早期診斷及提前檢測就顯得尤為重要。植物病毒學(xué)歷經(jīng)近百年的發(fā)展，植物病毒的檢測方法與手段也在不斷發(fā)展與改進(jìn)。常用的方法有侵染力測定法、血清學(xué)方法、電子顯微鏡計數和分子生物學(xué)法等。

1.4.1侵染力測定法

侵染力測定法是將病毒樣本接種在植物上，根據侵染力的大小定量。它的靈敏度在所有定量法中是比較高的，而且是其他定量法的基礎。設計一種新的定量法，如果不經(jīng)過(guò)侵染力的驗證，將無(wú)法判斷測定的是病毒或者是具有侵染力的病毒。侵染力測定法包括局部枯斑法、淀粉－碘斑法、系統感染率的測定法等。侵染力測定多用粗汁液來(lái)接種，為了避免抑制物質(zhì)的作用和使半葉枯斑數目控制在一定范圍，須用緩沖液稀釋接種物。

局部枯斑法 1929年F.O.Holmes發(fā)現TMV在心葉煙（Nicotiana glutinosa）接種葉片上引起局部壞死斑點(diǎn)，在一定的病毒濃度范圍內，所產(chǎn)生的斑點(diǎn)數目與病毒濃度成正比例。這一發(fā)現成為病毒侵染性定量測定的基礎（田波，1987）。所有機械傳染的病毒都有可能應用局部斑點(diǎn)法，但實(shí)際上只有少數病毒具有可用于定量測定的局部斑寄主。一個(gè)待測樣品所形成的斑點(diǎn)數目除取決于接種物中病毒濃度外，還受試驗植物種類(lèi)、環(huán)境條件和接種物中是否含有病毒抑制物質(zhì)的影響。

淀粉－碘斑法 當所研究的病毒沒(méi)有過(guò)敏性枯斑寄主時(shí)，采用此法。Holmes（1931）發(fā)現TMV接種的煙葉上有時(shí)形成明顯的黃化斑塊，但不能用于計數。將這種接種葉用95％乙醇加熱到80℃固定，然后用I2和KI混合液（10克I2，30克KI，1500毫升H2O）染色時(shí)，則侵染點(diǎn)處出現淀粉－碘的藍色反應。當下午采摘葉片，褪色過(guò)夜，然后用碘液染色，則侵染點(diǎn)較周?chē)�組織著(zhù)色淺；當采摘葉片前，植株先在黑暗中放幾個(gè)小時(shí)，再用碘液染色，則侵染點(diǎn)組織著(zhù)色深。這是由于病毒侵染既降低光合組織中碳水化合物的形成，也降低碳水化合物從光合組織中的運出。淀粉－碘染色的強弱受環(huán)境條件的影響較大，不如局部枯斑法可靠，但在標準化條件下仍可用于侵染性的定量測定。

侵染性滴度法 當上述方法都不適用時(shí)，可采用侵染性滴度法。即把欲測定樣品用緩沖液稀釋?zhuān)�可用十倍稀釋、成倍稀釋、半倍稀釋或更低稀釋。這種方法的缺點(diǎn)是需用大量實(shí)驗植物，但可得到較好的結果。此方法可用于介體傳染的病毒。

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