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      首頁(yè) > 微生物知識->微生物基本知識->細胞培養的微生物污染排除

    細胞培養的微生物污染排除



    錄入時(shí)間:2011-8-16 15:37:52 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

    一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體
    1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃備用,使用濃度參考《組織培養和分子細胞學(xué)技術(shù)》117頁(yè)表6-2。
    2.處理:取受支原體污染的細胞,吸除培養液,加入含BM-1的1640培養液培養3天后,吸除培養液,再加入含BM-2的1640培養液培養4天,如此連續三個(gè)輪回。
    3.檢測:用33258熒光染色鏡檢(每個(gè)輪回末應檢測一次)。
    4.培養:清除支原體后的細胞,在不加上述抗生素的培養液中,再傳代培養3~4次。
    5.鏡檢:如清除不徹底可再進(jìn)行處理至純凈為止(一般3個(gè)輪回即能被完全消除)。BM-1和BM-2與CIP(4-氟,2-羥基喹啉)聯(lián)合應用亦可,即先用含BIP培養液培養12天后,再按上述方法處理。 
    二、加溫除菌法:把受污染的細胞置41℃中作用5~10小時(shí)。 
    三、動(dòng)物體內接種除菌法:把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中,借動(dòng)物免疫系統消滅支原體,而腫瘤細胞卻能在體內繼續生長(cháng),待一定時(shí)間后,從體內取出細胞再進(jìn)行培養繁殖。
    四、巨噬細胞吞噬法:從動(dòng)物腹腔采取巨噬細胞,為排除其它細胞成分,可先進(jìn)行純化,然后再加入被支原體污染的細胞培養液中混合培養。在培養過(guò)程中,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養法驗證,取出支持物逐日染色、鏡檢觀(guān)察,至支原體已被消除干凈為止。

     

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