細胞學(xué)技術(shù)的一般環(huán)節
錄入時(shí)間:2011-8-11 15:09:36
來(lái)源：生物在線(xiàn)
一、紡錘體阻斷劑（Spindle inhibitor）
在有絲分裂過(guò)程中，隨著(zhù)紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀(guān)察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因
此，改變細胞質(zhì)的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開(kāi)，且染色體縊痕區更為清楚。
在培養中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋
水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養前處理2—4小時(shí)。但在實(shí)際工作中需要借助濃度和處理時(shí)間來(lái)控制染色
體的收縮程度。秋水仙素作用時(shí)間越長(cháng)，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實(shí)驗室經(jīng)驗而定。
二、低滲液（hypotonic solution）
低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、氯化鉀（0.075M）
等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展，同時(shí)可使粘附于染色體的核
仁物質(zhì)散開(kāi)，以便能在一個(gè)平面上觀(guān)察所有染色體形態(tài)。
實(shí)驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決于實(shí)際操作，鑒于實(shí)驗的連續性和穩定性，本實(shí)驗室采用0.35%KCl），其優(yōu)點(diǎn)有：①染
色體輪廓清楚，可染色性強，染色時(shí)間短，②用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。
低滲處理為37℃，15－25分鐘，以預實(shí)驗條件為準。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定并維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優(yōu)良染色效果。
單純的固定液一般難以達到這些要求，因此在實(shí)驗中使用兩種混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱(chēng)的卡諾氏固定液是
效果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時(shí)配制，長(cháng)時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間15分鐘至24小時(shí)，冰箱、室
溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細胞膨脹、染色體鋪展，但易導致細胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴片使細胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細胞膜破裂，染色體分散開(kāi)。載玻片可用冰片和干片，效果均好。滴片后需空氣干燥。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配制后原液儲存。在常規染色中，并不比其他染料優(yōu)越，但在顯帶技術(shù)
中，卻是無(wú)可比擬的。
Giemsa工作液在使用前臨時(shí)配制，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10－40份）。染色后，染色質(zhì)呈紅色，細胞核是藍色。
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