放線(xiàn)菌制片及形態(tài)觀(guān)察

目的要求

學(xué)會(huì )放線(xiàn)菌制片方法，觀(guān)察其形態(tài)特征。

材料

1. 菌種：細黃鏈霉菌（Streptomyces microflavus）馬鈴薯平板培養3～4天。

2. 染料：石炭酸復紅液、美蘭液。

3. 其他：顯微鏡、載玻片、接種針、香柏油、二甲苯等。

原理

放線(xiàn)菌是單細胞核微生物，菌絲體分為營(yíng)養菌絲和氣生菌絲兩部分。部分氣生菌絲的頂端會(huì )分化成孢子絲，呈螺旋狀、波浪狀或分枝狀等。在孢子絲頂端產(chǎn)生孢子，孢子常呈球形、橢圓形或桿形等，氣生菌絲和孢子的形狀、顏色常作為分類(lèi)的依據，放線(xiàn)菌的菌絲的寬度與細菌類(lèi)似，必須染色后才能進(jìn)行觀(guān)察。

方法

1．營(yíng)養菌絲的制片與觀(guān)察

（l）用接種針取細黃鏈霉菌菌落（連同培養基一起）置于載玻片中央。

（2）另取一塊載玻片用力將其壓碎，棄去培養基，制成涂片，干燥、固定。

（3）用美蘭染色液或石炭酸復紅染色液染色30～60秒鐘，水洗、干燥、用油鏡觀(guān)察營(yíng)養菌絲的形態(tài)。

2．氣生菌絲、孢子絲的觀(guān)察

將培養皿打開(kāi)，放在低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀(guān)察氣生菌絲和孢子絲的形態(tài)（分枝、卷曲情況等）。

3．孢子鏈及孢子的觀(guān)察（印片法）

取潔凈的蓋玻片一塊，在菌落上面輕輕地壓一下，然后將印有痕跡的一面朝下，放在滴有一滴美蘭液的載玻片上，使孢子等印浸在染色液中，制成印片。用油鏡觀(guān)察孢子鏈及孢子的形態(tài)。

4．埋片法的制片觀(guān)察

（1）在馬鈴薯浸汁瓊脂培養基平板上，劃線(xiàn)接入少量細黃鏈霉菌的孢子，在接種線(xiàn)旁?xún)A斜地插入無(wú)菌蓋玻片，于28～30℃培養。

（2）培養3～4天后，菌絲沿著(zhù)蓋玻片向上生長(cháng)，待菌絲長(cháng)好后，取出蓋玻片放在干凈的載玻片上，置于顯微鏡下觀(guān)察。

內容

按上述方法制片觀(guān)察細黃鏈霉菌的營(yíng)養菌絲、孢子絲、孢子鏈及孢子的形態(tài)。

作業(yè)

1. 將觀(guān)察結果繪圖，并注明各部位名稱(chēng)。

2. 比較各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)；在何種情況下，適宜用何種制片方法來(lái)觀(guān)察，效果最好。

3. 放線(xiàn)菌的菌體為何不易挑取?

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